Chapitre II : Méthode d’identification
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Le degré de polymorphisme de ces marqueurs est donc bien supérieur à celui des
polymorphismes de restriction et leur capacité à distinguer les individus est d’autant
meilleure. C’est Alec Jeffreys, de l’Université d’Oxford, qui fut le premier à utiliser les
minisatellites pour créer des empreintes génétiques; il est désormais considéré comme le père
des empreintes génétiques (Khazaal, et al., 2005).
La révélation des polymorphismes de type minisatellites fait appel à la technique de
Southernblot .Cependant cette technique est longue à mettre en œuvre (plusieurs jours). Sa
limite essentielle est d’exiger des quantités importantes d’ADN (de l’ordre de 5 à 10
microgrammes), qui doit en plus être de bonne qualité (Khazaal, et al., 2005).
Vers la fin des années 1980, la découverte d’un nouveau type de polymorphismes, les
microsatellites, couplée à l’utilisation d’une nouvelle technique révolutionnaire, la PCR, a
permis une nette avancée pour la réalisation d’empreintes génétiques. Les microsatellites
comportent des séries de répétitions d'un motif de base court (1 à 4 paire(s) de bases) et sont
répartis sur l'ensemble du génome. Le nombre de répétitions peut varier de 10 à 40 environ.
Comme dans le cas des minisatellites, le polymorphisme tient au nombre variable de
répétitions d’unités observées dans les différents allèles. Chaque marqueur présente une
dizaine d’allèles différents, parfois plus. Les séquences à analyser sont donc courtes et
parfaitement adaptées à une révélation par la technique de PCR. Les différents allèles sont
reconnus en fonction de leur taille, qui est mesurée en paires de bases d’ADN(Khazaal, et al,
2005).
Aspects techniques, réalisation d'une empreinte génétique :
Au laboratoire les échantillons prélevés sont traités de façon à extraire l’ADN présent
sur les pièces.
Les microsatellites à analyser sont alors amplifiés sur l’ADN grâce à la technique de
PCR avec des amorces spécifiques de chacun des microsatellites.
Au terme de la réaction d’amplification, l'ADN amplifié est soumis à un champ
électrique (on parle d'électrophorèse) et les allèles des différents microsatellites sont
séparés en fonction de leur taille. Plus les fragments sont petits, plus ils migrent
rapidement et donc pour une plus longue distance.
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Le degré de polymorphisme de ces marqueurs est donc bien supérieur à celui des
polymorphismes de restriction et leur capacité à distinguer les individus est d’autant
meilleure. C’est Alec Jeffreys, de l’Université d’Oxford, qui fut le premier à utiliser les
minisatellites pour créer des empreintes génétiques; il est désormais considéré comme le père
des empreintes génétiques (Khazaal, et al., 2005).
La révélation des polymorphismes de type minisatellites fait appel à la technique de
Southernblot .Cependant cette technique est longue à mettre en œuvre (plusieurs jours). Sa
limite essentielle est d’exiger des quantités importantes d’ADN (de l’ordre de 5 à 10
microgrammes), qui doit en plus être de bonne qualité (Khazaal, et al., 2005).
Vers la fin des années 1980, la découverte d’un nouveau type de polymorphismes, les
microsatellites, couplée à l’utilisation d’une nouvelle technique révolutionnaire, la PCR, a
permis une nette avancée pour la réalisation d’empreintes génétiques. Les microsatellites
comportent des séries de répétitions d'un motif de base court (1 à 4 paire(s) de bases) et sont
répartis sur l'ensemble du génome. Le nombre de répétitions peut varier de 10 à 40 environ.
Comme dans le cas des minisatellites, le polymorphisme tient au nombre variable de
répétitions d’unités observées dans les différents allèles. Chaque marqueur présente une
dizaine d’allèles différents, parfois plus. Les séquences à analyser sont donc courtes et
parfaitement adaptées à une révélation par la technique de PCR. Les différents allèles sont
reconnus en fonction de leur taille, qui est mesurée en paires de bases d’ADN(Khazaal, et al,
2005).
Aspects techniques, réalisation d'une empreinte génétique :
Au laboratoire les échantillons prélevés sont traités de façon à extraire l’ADN présent
sur les pièces.
Les microsatellites à analyser sont alors amplifiés sur l’ADN grâce à la technique de
PCR avec des amorces spécifiques de chacun des microsatellites.
Au terme de la réaction d’amplification, l'ADN amplifié est soumis à un champ
électrique (on parle d'électrophorèse) et les allèles des différents microsatellites sont
séparés en fonction de leur taille. Plus les fragments sont petits, plus ils migrent
rapidement et donc pour une plus longue distance.