Principe de la méthode de filtration sur membrane
Le principe de la méthode repose sur 4 étapes qui sont la filtration, la culture (milieu
d'ensemencement), l’incubation et le dénombrement des colonies (Annexe III.5).
- La filtration d’un volume donné d’échantillon (100 ml) sur une membrane de cellulose
stérile de 0.45μm de porosité.
- Le dépôt de la membrane sur un milieu gélosé sélectif ;
- L’incubation aux températures et temps convenables ;
- Le dénombrement des UFC dans le volume de référence choisi.
Mode opératoire
La réalisation de la technique de filtration sur membrane a été faite comme suit :
1. Lavage et stérilisation de l’équipement de filtration avec de l’alcool puis par flambage ;
2. Mise en place de la pompe à vide ;
3. Prendre une membrane filtrante stérile près du support du filtre ;
4. Placer l’entonnoir sur le support et le fixer fermement ;
5. Verser dans chaque entonnoir un volume de 100 ml d’échantillon bien homogénéisé ;
6. Faire le vide jusqu’à filtration totale de l’échantillon ;
7. Retirer l’entonnoir et déposer la membrane filtrante à l’aide d’une pince stérile sur la gélose
appropriée ;
8. déposer la membrane en la déroulant pour tenir un contact étroit avec la gélose ;
9. inscrire sur la boite de Pétrie le numéro de l'échantillon ;
10. placer les boites de Pétrie en position inverse et les incuber à température optimale de
croissance du germe recherché ;
11. stériliser le dispositif avec de l’alcool et par Flambage à l’aide du bec benzène après
chaque échantillon filtré afin d’éviter toute contamination possible.
II.6 Analyse des hydrocarbures dans l’eau de mer (matériel utilisé dans l’annexe
III.6)
II.6.1 Extraction
La procédure d’extraction est celle décrite par Roussel (1983). C’est une extraction
liquide-liquide réalisé avec l’Hexane (C’est un solvant organique plus léger que l’eau, au
moment de l’agitation il permet la dispersion du solvant dans l’eau de mer et la formation
d’une phase organique non miscible à la phase, piégeant ainsi les hydrocarbures présents dans
l’eau.) dans une ampoule à décanter de 2L.
Matériel et méthodes
41
Le principe de la méthode repose sur 4 étapes qui sont la filtration, la culture (milieu
d'ensemencement), l’incubation et le dénombrement des colonies (Annexe III.5).
- La filtration d’un volume donné d’échantillon (100 ml) sur une membrane de cellulose
stérile de 0.45μm de porosité.
- Le dépôt de la membrane sur un milieu gélosé sélectif ;
- L’incubation aux températures et temps convenables ;
- Le dénombrement des UFC dans le volume de référence choisi.
Mode opératoire
La réalisation de la technique de filtration sur membrane a été faite comme suit :
1. Lavage et stérilisation de l’équipement de filtration avec de l’alcool puis par flambage ;
2. Mise en place de la pompe à vide ;
3. Prendre une membrane filtrante stérile près du support du filtre ;
4. Placer l’entonnoir sur le support et le fixer fermement ;
5. Verser dans chaque entonnoir un volume de 100 ml d’échantillon bien homogénéisé ;
6. Faire le vide jusqu’à filtration totale de l’échantillon ;
7. Retirer l’entonnoir et déposer la membrane filtrante à l’aide d’une pince stérile sur la gélose
appropriée ;
8. déposer la membrane en la déroulant pour tenir un contact étroit avec la gélose ;
9. inscrire sur la boite de Pétrie le numéro de l'échantillon ;
10. placer les boites de Pétrie en position inverse et les incuber à température optimale de
croissance du germe recherché ;
11. stériliser le dispositif avec de l’alcool et par Flambage à l’aide du bec benzène après
chaque échantillon filtré afin d’éviter toute contamination possible.
II.6 Analyse des hydrocarbures dans l’eau de mer (matériel utilisé dans l’annexe
III.6)
II.6.1 Extraction
La procédure d’extraction est celle décrite par Roussel (1983). C’est une extraction
liquide-liquide réalisé avec l’Hexane (C’est un solvant organique plus léger que l’eau, au
moment de l’agitation il permet la dispersion du solvant dans l’eau de mer et la formation
d’une phase organique non miscible à la phase, piégeant ainsi les hydrocarbures présents dans
l’eau.) dans une ampoule à décanter de 2L.
Matériel et méthodes
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