Chapitre II :
Matériel et méthodes.
27
II.6.4 Identification par galerie API 20 E : La galerie est utilisée comme test
confirmatif.
Principe
Le système API20E (BioMérieux), est une version miniaturisée et standardisée des
techniques biochimiques conventionnelles pour l’identification des bactéries. Lorsqu’une
suspension bactérienne de densité convenable est répartie dans les différentes alvéoles qui
composent la microgalerie (contenant des substrats déshydratés), les réactions produites
durant la période d’incubation se traduisent par des changements de couleur spontanés ou
révélés par addition de réactifs. Elle permet l’identification d’une centaine de bacilles à
Gram négatif dont les Entérobactéries. Elle comprend 20 tests biochimiques.
Mode opératoire
A l’aide d’une pipette, on réalise une suspension de la souche à étudier à partir d’une seule
colonie isolée sur milieu gélosé et 5 ml d’eau distillée stérile ou d’eau physiologique, puis
on remplit les cupules de la galerie en évitant les bulles d’air (fig.II.9). En ce qui concerne
les substrats dont le sigle est encadré, la cupule doit aussi être remplie de manière à créer
un ménisque. Quant aux substrats dont le sigle est souligné, la cupule doit être remplie
d'huile de paraffine soit pour créer l'anaérobiose (absence d'oxygène), soit pour maintenir
en solution les ions volatils produits par la réaction et ainsi assurer le virage de l'indicateur
coloré de pH. Les creux du support de la galerie doivent être remplis d'eau pour former une
chambre humide, puis la galerie est posée dans le support et le couvercle par-dessus.
L'ensemble est incubé à une température adaptée pendant 24 à 48 h.
Lecture
Après addition des réactifs nécessaires à la révélation de différents tests, la galerie est lue
conformément aux indications du fabricant et codée. Pour cela, les tests sont groupés par
trois successivement de gauche à droite, Les tests négatifs sont toujours codés 0 alors que
le code affecté aux tests positifs varie selon la position du test dans le triplet : 1 pour le
premier test, 2 pour le second, 4 pour le troisième. Les 3 résultats du triplet sont
additionnés (il existe seulement huit possibilités pour la somme d'un triplet : 0, 1, 2, 3, 4, 5,
6, 7). Les sommes de chaque triplet lu de gauche à droite forment un code d'au moins 7
chiffres qui correspond au profil biochimique du microorganisme étudié. La comparaison
de ce code à ceux référencés dans la base de données gérée par Biomérieux, permet en
général d'identifier ce micro-organisme. Si le code numérique obtenu ne figure pas dans
Matériel et méthodes.
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II.6.4 Identification par galerie API 20 E : La galerie est utilisée comme test
confirmatif.
Principe
Le système API20E (BioMérieux), est une version miniaturisée et standardisée des
techniques biochimiques conventionnelles pour l’identification des bactéries. Lorsqu’une
suspension bactérienne de densité convenable est répartie dans les différentes alvéoles qui
composent la microgalerie (contenant des substrats déshydratés), les réactions produites
durant la période d’incubation se traduisent par des changements de couleur spontanés ou
révélés par addition de réactifs. Elle permet l’identification d’une centaine de bacilles à
Gram négatif dont les Entérobactéries. Elle comprend 20 tests biochimiques.
Mode opératoire
A l’aide d’une pipette, on réalise une suspension de la souche à étudier à partir d’une seule
colonie isolée sur milieu gélosé et 5 ml d’eau distillée stérile ou d’eau physiologique, puis
on remplit les cupules de la galerie en évitant les bulles d’air (fig.II.9). En ce qui concerne
les substrats dont le sigle est encadré, la cupule doit aussi être remplie de manière à créer
un ménisque. Quant aux substrats dont le sigle est souligné, la cupule doit être remplie
d'huile de paraffine soit pour créer l'anaérobiose (absence d'oxygène), soit pour maintenir
en solution les ions volatils produits par la réaction et ainsi assurer le virage de l'indicateur
coloré de pH. Les creux du support de la galerie doivent être remplis d'eau pour former une
chambre humide, puis la galerie est posée dans le support et le couvercle par-dessus.
L'ensemble est incubé à une température adaptée pendant 24 à 48 h.
Lecture
Après addition des réactifs nécessaires à la révélation de différents tests, la galerie est lue
conformément aux indications du fabricant et codée. Pour cela, les tests sont groupés par
trois successivement de gauche à droite, Les tests négatifs sont toujours codés 0 alors que
le code affecté aux tests positifs varie selon la position du test dans le triplet : 1 pour le
premier test, 2 pour le second, 4 pour le troisième. Les 3 résultats du triplet sont
additionnés (il existe seulement huit possibilités pour la somme d'un triplet : 0, 1, 2, 3, 4, 5,
6, 7). Les sommes de chaque triplet lu de gauche à droite forment un code d'au moins 7
chiffres qui correspond au profil biochimique du microorganisme étudié. La comparaison
de ce code à ceux référencés dans la base de données gérée par Biomérieux, permet en
général d'identifier ce micro-organisme. Si le code numérique obtenu ne figure pas dans