Chapitre II :
Matériel et méthodes.
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 Lecture
A l’issue de cette coloration, on peut distinguer :
- Des bactéries colorées en violet foncé (Gram positif).
- Des bactéries colorées en rose ou rouge pâle (Gram négatif).
II.6.2 Test d’oxydase
Cette réaction est recherchée sur des cultures en milieu gélosé exempt de sucres
fermentescibles ou de sang. Les bactéries possédant des oxydases en présence de sucres
donnent des métabolites qui se combinent avec le réactif utilisé pour donner une coloration
variable selon la bactérie.
La réaction des oxydases se fait à l’aide des disques prêts à l’emploi, imprégnés d’eau
distillée sur lequel on dépose une colonie bactérienne.
 Lecture
Une réaction positive se traduit par l’apparition d’une coloration violet à l’endroit où on a
déposé la colonie, soit immédiatement, soit quelques secondes après.
II.6.3 Test de catalase
À partir d’une colonie bien isolée sur le milieu de culture, prélever aseptiquement un faible
inoculum à l’aide d’un bâtonnet de bois ou d’un fil à boucle qui n’interfère pas avec une
réaction au peroxyde d’hydrogène et l’étendre sur une lame de verre propre. Ajouter 1 ou 2
gouttes d’une solution de peroxyde d’hydrogène à 3 % (V/V). L’apparition d’effervescence
est causée par la décomposition du peroxyde d’hydrogène (H 2 O 2 ) en eau et en oxygène et
elle démontre la présence de l’enzyme catalase.
A partir des colonies prélevées avec soin sur la gélose, nous avons réalisé un frottis sur
lequel on dépose quelques gouttes de peroxyde d’hydrogène
 Lecture
 La présence de catalase se matérialise par une production de bulles.