Chapitre II
MATERIEL ET METHODES
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- Placer l’entonnoir sur le support et le fixer fermement ;
- Verser dans chaque entonnoir un volume de (100 ml) d’échantillon ou des dilutions bien
homogénéisé ;
- Faire le vide jusqu’à filtration totale de l’échantillon ;
- Retirer l’entonnoir et déposer la membrane filtrante à l’aide d’une pince stérile sur un
milieu adapté aux bactéries recherchées (milieu nutritif spécifique) ;
- Déposer la membrane en la déroulant pour tenir un contact étroit avec la gélose, en
évitant la présence de bulles d’air ;
- Etiqueter convenablement les boites de Pétri ;
- Incuber les boites couvercle en bas à une température et une durée spécifique pour
chaque germe ;
- Identifier et dénombrer les colonies des germes recherchés après leur incubation.
4.2 Dénombrement des coliformes des coliformes totaux et coliformes thermotolérant
La recherche des coliformes totaux et thermotolérants par filtration de 100ml d’échantillon ou
des dilutions, se fait par la mise en évidence de la fermentation du lactose en espace de 24 à 48h
à 37°C pour les coliformes totaux et 44°C pour les coliformes thermotolérants. Cette
fermentation se traduit par un virage de couleur de l’indicateur de pH du milieu gélosé. Le
nombre de colonies trouvées est exprimé en Unité Formant Colonie dans100 ml d’eau analysée
(UFC/100ml). (Figure II.4)
 Mode opératoire
- Filtrer un volume de 100ml d'échantillon ou des dilutions ;
- Déposer soigneusement la membrane filtrante quadrillée sur un milieu gélosé
sélectif « Tergitol ».
- Cette opération est répétée deux fois :
 L'une des boites est incubée à 37°C pendant 24h pour la recherche des
coliformes totaux ;
 l'autre à 44°C pour la recherche des coliformes thermotolérants.
- E.coli :
La recherche qualitative de la présence d’Escherichia coli a été réalisée sur milieu
Schubert parmi les colonies retrouvées à 44°C. Ce test consiste en l’ensemencement
d’un tube Schubertpendant 18h