Chapitre II : Matériel et méthodes
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P0 : poids du ballon vide en grammes
5.4. Dosage des protéines totales
La teneur en protéines totales est déterminée selon la méthode de Bradford (1976), qui est
une méthode colorimétrique, faisant référence à l’équation de la droite de la courbe
d’étalonnage tracée à partir du changement de l’absorbance lue, à la longueur d’onde 595
nm, suite au changement de la couleur de la solution étalon suivant la concentration de la
BSA (Bovine Sérum Albumine).
5.4.1. Mode opératoire
On doit d’abord préparer le réactif de Bradford et le diluer à 1/10, ensuite on prépare une
gamme étalon de la BSA (1 mg/ml) dans des tubes à essai allant de 0 à 100 μl, on complète
le volume de chaque tube à 100 μl, puis on ajoute 3 ml du réactif de Bradford.
On prépare en parallèle une série de tubes contenant différents volumes de chaque
échantillon, déjà préparés en homogénéisant 25 g de la chair bien broyée dans 225 ml d’eau
distillée stérile.
On trace la courbe d’étalonnage à partir des résultats obtenus par la lecture au
spectrophotomètre (595 nm) : DO = a [BSA] + b,
À partir de cette équation on arrive à calculer la concentration des protéines totales dans
chaque échantillon.