• Déposer la membrane en la déroulant pour tenir un contact étroit avec la
gélose.
• Inscrire sur la boite de Petri le numéro de l’échantillon et le volume filtré.
• Placer les boites de Petri en position inverse pour empêcher la
condensation sur les membranes et les incubés à une température donnée
et pendant une duré spécifique pour chaque germe :
Les coliformes totaux, incubation à 37°C pendant 24heures
(colonies jaunes).
Les coliformes fécaux, incubation à 44°C pendant 48 heures
(colonies jaune, orange).
Les Streptocoques, incubés à 37°C pendant 48 heures (rouge
brique).
• Flambage du dispositif par le bec bunsen après chaque échantillon filtré,
afin d’éviter toute contamination possible.
• Test confirmatif.
1. Pour les coliformes.
On’ a fait le repiquage dans une paillasse javellisé et devant un becbensen :
A partir des boites incubées, on’ a pris une colonie
jaune.
On a ensemencé un tube contient l’eau peptonée
exempte d’indole.
Incubation à 44°C en bain marie pendant 24h.
La confirmation se fait par l’apparition d’un anneau
rouge en présence du réactif de Kovacs (3 à 4 gouttes).
Anneau rouge, donc production d’indole, veut dire la
présence d’E.coli.
2. Pour les Streptocoques.
Dans une paillasse javellisé et devant un bec-bensen
A partir des boites précédentes, on’ a enlevé les
membranes filtrantes, et on’ a les mis sur un autre
milieu gélose BEA (Bile et Esculine Azide).
On’ a les laissés 20 minutes devant le bec-benzen.
L’apparition des colonies avec un halo noir confirme la
présence des Streptocoques.
53