Matériel et méthodes
33
➢ Expressions des résultats :
Nous avons mesuré la densité optique par spectrophotomètre BHIMADZU de l’ENSSMAL de la
solution récupérée (le surnagent dilué) à 615 nm, 652 nm, 620 nm et 280 nm.
Le calcul du pourcentage en phycocyanine est réalisé selon la formule suivante :
% en phycocyanine : 1,873 × (Abs620 – 0.474×Abs652) * f/C
Avec :
C : % de la concentration de spiruline sèche mise à tremper dans l’eau autour de 4 %
f : le facteur de dilution en volume (mL).
3.1.2 Extraction par congélation /décongélation :
Cette méthode est faite selon le protocole de MINKOVA et al., 2003.
➢ Principe :
Cette méthode d’extraction est basée sur le processus de destruction d’une cellule en provoquant
l’éclatement de la membrane plasmique, c’est la méthode la moins rapide mais qui a la meilleure
efficacité d’extraction du pigment bleu.
La phase de congélation /décongélation permet la fragilisation des parois et membranes cellulaires,
suite à un refroidissement brusque et à la concentration du soluté intra et extracellulaire, la
formation de cristaux intra et extracellulaire entraine des cassures dans la cellule, l’extraction a été
réalisée par des étapes de congélation suivi d’une décongélation répétées des cellules dans du
tampon phosphate (CHEBIRA, 2015).
L’extraction par congélation/décongélation a l'avantage d'être simple, reproductible et n'entraîne
pas la perte des fonctions biologiques de la protéine.
➢ Mode opératoire :
• On met 100 mg de spiruline sec dans 200 ml de tampon.
• La solution subit des cycles de congélation /décongélation(-20/20°C) jusqu’à la destruction
des cellules (l’éclatement de la membrane) (deux cycles dans notre cas jusqu’à l’obtention
de la couleur bleu-vert de l’extrait).
33
➢ Expressions des résultats :
Nous avons mesuré la densité optique par spectrophotomètre BHIMADZU de l’ENSSMAL de la
solution récupérée (le surnagent dilué) à 615 nm, 652 nm, 620 nm et 280 nm.
Le calcul du pourcentage en phycocyanine est réalisé selon la formule suivante :
% en phycocyanine : 1,873 × (Abs620 – 0.474×Abs652) * f/C
Avec :
C : % de la concentration de spiruline sèche mise à tremper dans l’eau autour de 4 %
f : le facteur de dilution en volume (mL).
3.1.2 Extraction par congélation /décongélation :
Cette méthode est faite selon le protocole de MINKOVA et al., 2003.
➢ Principe :
Cette méthode d’extraction est basée sur le processus de destruction d’une cellule en provoquant
l’éclatement de la membrane plasmique, c’est la méthode la moins rapide mais qui a la meilleure
efficacité d’extraction du pigment bleu.
La phase de congélation /décongélation permet la fragilisation des parois et membranes cellulaires,
suite à un refroidissement brusque et à la concentration du soluté intra et extracellulaire, la
formation de cristaux intra et extracellulaire entraine des cassures dans la cellule, l’extraction a été
réalisée par des étapes de congélation suivi d’une décongélation répétées des cellules dans du
tampon phosphate (CHEBIRA, 2015).
L’extraction par congélation/décongélation a l'avantage d'être simple, reproductible et n'entraîne
pas la perte des fonctions biologiques de la protéine.
➢ Mode opératoire :
• On met 100 mg de spiruline sec dans 200 ml de tampon.
• La solution subit des cycles de congélation /décongélation(-20/20°C) jusqu’à la destruction
des cellules (l’éclatement de la membrane) (deux cycles dans notre cas jusqu’à l’obtention
de la couleur bleu-vert de l’extrait).