Matériel et méthodes
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II.5.6 Identification des coliformes par la méthode des galeries API 20E
Principe :
La galerie API 20E est un système d’identification des bacilles à gram négatif, elle comporte
20 tests biochimiques standardisés et miniaturisé qui sont inoculés avec une suspension
bactérienne à identifier. Les réactions produites pendant la période d’incubation se traduisent
par des virages colorés spontanés ou révélés par l’addition de réactifs (Biomérieux).
La lecture de ces réactions se fait à l’aide du tableau de lecture et l’identification est obtenue à
l’aide du catalogue analytique.
Technique :
1. Préparation de la galerie :
- Réunir fond et couvercle d’une boite d’incubation et répartir de l’eau distillée dans les
alvéoles pour créer une atmosphère humide.
- Inscrire la référence de la souche sur la languette latérale de la boite.
- Sortir la galerie de son emballage et placer stérilement dans la boite d’incubation.
2. Préparation de l’inoculum :
A l’aide de l’anse de platine, une colonie bien isolée sur milieu gélosé est prélevée et mise en
suspension dans de l’eau physiologique stérile.
3. Inoculation de la galerie :
- Remplir les tubes et les cupules des tests (CIT, VP, et GEL) avec la suspension
bactérienne en utilisant la micropipette.
- Remplir uniquement les tubes des autres tests.
- Créer une anaérobiose dans les tests ADH, LDH, ODC, H 2 S et UREE en remplissant
la cupule par l’huile de paraffine.
- Refermer la boite d’incubation et incuber à 37°C pendant 24h à 48h.