CHAPITRE II
Matériel et méthodes
29
2.2.2. Analyse qualitative des caroténoïdes
2.2.2.1. Identification spectrale
Une analyse qualitative par spectrophotométrie UV-Visible a été utilisée sur les extraits
pigmentaires obtenues afin d’identifier les différents caroténoïdes existants, dans une plage de
balayage entre 380 et 800 nm de longueur d’onde. Les résultats obtenus (spectres d’absorption)
ont ensuite été rapportés sur ordinateur et identifiés selon la littérature.
2.2.2.2. Identification par chromatographie sur couches minces « CCM »
Deux techniques de chromatographie sur couches minces (CCM) ont été utilisées pour identifier
les caroténoïdes présents dans les six échantillons d’algues : une CCM d’adsorption et une CCM
de partage. Dans la première, les couches ont été donc imprégnées par l’huile de vaseline et dans
la seconde ; les couches n’ont pas été imprégnées.
Deux protocoles ainsi que deux systèmes d’éluants différents pour la phase mobile ont été utilisés
pour chacune de ces deux techniques.
Séparation des caroténoïdes sur couches imprégnées par l’huile de vaseline (protocole
travaux pratique 4
ème année aquaculture)
Réalisation
-1g d’échantillon est d’abord broyé dans 5 ml d’acétone avec la présence du sulfate de sodium
NaSO4 (une pincée) et de carbonate de calcium CaCO3 (une pincée également) jusqu’à obtention
d’une solution bien verte.
-Filtration de cette solution avec du papier filtre.
-Ajout de 0.2 ml d’éther de pétrole à 1 ml de cette solution.
-En parallèle, la plaque chromatographique prête à l’emploi est plongée dans une cuve
chromatographique contenant une solution d’huile de vaseline à 8% dans l’éther de pétrole.
-L’imprégnation est interrompue quand le front arrive à 3 cm du bord supérieur.
-Les plaques sont ensuite séchées à l’air libre pour l’élimination totale de l’éther de pétrole.
-Une ligne de départ est tracée à 2 cm dans la partie non imprégnée sur laquelle une goutte de
chaque échantillon est déposée deux fois, à l’aide d’une micropipette.
Matériel et méthodes
29
2.2.2. Analyse qualitative des caroténoïdes
2.2.2.1. Identification spectrale
Une analyse qualitative par spectrophotométrie UV-Visible a été utilisée sur les extraits
pigmentaires obtenues afin d’identifier les différents caroténoïdes existants, dans une plage de
balayage entre 380 et 800 nm de longueur d’onde. Les résultats obtenus (spectres d’absorption)
ont ensuite été rapportés sur ordinateur et identifiés selon la littérature.
2.2.2.2. Identification par chromatographie sur couches minces « CCM »
Deux techniques de chromatographie sur couches minces (CCM) ont été utilisées pour identifier
les caroténoïdes présents dans les six échantillons d’algues : une CCM d’adsorption et une CCM
de partage. Dans la première, les couches ont été donc imprégnées par l’huile de vaseline et dans
la seconde ; les couches n’ont pas été imprégnées.
Deux protocoles ainsi que deux systèmes d’éluants différents pour la phase mobile ont été utilisés
pour chacune de ces deux techniques.
Séparation des caroténoïdes sur couches imprégnées par l’huile de vaseline (protocole
travaux pratique 4
ème année aquaculture)
Réalisation
-1g d’échantillon est d’abord broyé dans 5 ml d’acétone avec la présence du sulfate de sodium
NaSO4 (une pincée) et de carbonate de calcium CaCO3 (une pincée également) jusqu’à obtention
d’une solution bien verte.
-Filtration de cette solution avec du papier filtre.
-Ajout de 0.2 ml d’éther de pétrole à 1 ml de cette solution.
-En parallèle, la plaque chromatographique prête à l’emploi est plongée dans une cuve
chromatographique contenant une solution d’huile de vaseline à 8% dans l’éther de pétrole.
-L’imprégnation est interrompue quand le front arrive à 3 cm du bord supérieur.
-Les plaques sont ensuite séchées à l’air libre pour l’élimination totale de l’éther de pétrole.
-Une ligne de départ est tracée à 2 cm dans la partie non imprégnée sur laquelle une goutte de
chaque échantillon est déposée deux fois, à l’aide d’une micropipette.