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Chapitre 02 : matériels et méthodes
III.2.3. Dosage Des Flavonoïdes Totaux
Principe
L’estimation de la teneur en flavonoïdes totaux contenus dans les extraits est réalisée par la
méthode de trichlorure d’aluminium (AlCl3). Les flavonoïdes contiennent des groupements
hydroxyles (OH) libres, ils forment des complexes jaunâtres par chélation des métaux (fer et
aluminium). Ceci traduit le fait que le métal (Al) perd deux électrons pour s’unir à deux atomes
d’oxygènes de la molécule phénolique qui agit comme donneur d’électrons. Le Chlorure
d’Aluminium forme des complexes acides stables avec le groupement cétonique C-4 et hydroxyle
C-3 ou C-5 de flavones et de flavonols et des complexes acides labiles avec les groupes
d'orthodihydroxyle des noyaux A ou B des flavonoïdes. Ces complexes peuvent être dosés par
spectrophotométrie UV-Visible. La concentration des flavonoïdes de l’extrait est calculée par la
suite à partir de l’équation de régression de la courbe d’étalonnage qui est établie avec la
Quercétine pure. (DEWANTO et al. 2002).
Mode opératoire
- Mettre 0,25 ml de chaque échantillon et y ajouter 1,25 ml d’eau distillée ;
- Ajouter 75 µl de NaNO2 ;
- Ajouter 150 μl d’AlCl3.6H2O après 6 minutes ;
- 5 minutes plus tard, ajouter 0,5 ml de NaOH 1 M ;
- Ajuster le volume à 2,5 ml avec l’eau distillée ;
- Secouer pendant 10 secondes ;
- Mesurer l'absorbance sans attendre à 510 nm contre un blanc.
Les résultats sont exprimés en milligramme d’équivalents Quercétine par g d’extrait sec (mg EQ/g
d’extrait).
Courbe d’étalonnage de la Quercétine
La courbe d’étalonnage est effectuée par Quercétine à différentes concentrations de 2 à 45 mg/l,
dans les mêmes conditions et les mêmes étapes du dosage. Les résultats sont ainsi exprimés en
milligramme d’équivalents de Quercétine par gramme de matière végétale sèche. (Ce travail est
effectué en collaboration avec des étudiants de l’ENSA vue le manque de produit à l’école).
Les étapes de dosage des flavonoïdes totaux sont résumées dans le schéma récapitulatif suivant
(Figure II. 7).
Chapitre 02 : matériels et méthodes
III.2.3. Dosage Des Flavonoïdes Totaux
Principe
L’estimation de la teneur en flavonoïdes totaux contenus dans les extraits est réalisée par la
méthode de trichlorure d’aluminium (AlCl3). Les flavonoïdes contiennent des groupements
hydroxyles (OH) libres, ils forment des complexes jaunâtres par chélation des métaux (fer et
aluminium). Ceci traduit le fait que le métal (Al) perd deux électrons pour s’unir à deux atomes
d’oxygènes de la molécule phénolique qui agit comme donneur d’électrons. Le Chlorure
d’Aluminium forme des complexes acides stables avec le groupement cétonique C-4 et hydroxyle
C-3 ou C-5 de flavones et de flavonols et des complexes acides labiles avec les groupes
d'orthodihydroxyle des noyaux A ou B des flavonoïdes. Ces complexes peuvent être dosés par
spectrophotométrie UV-Visible. La concentration des flavonoïdes de l’extrait est calculée par la
suite à partir de l’équation de régression de la courbe d’étalonnage qui est établie avec la
Quercétine pure. (DEWANTO et al. 2002).
Mode opératoire
- Mettre 0,25 ml de chaque échantillon et y ajouter 1,25 ml d’eau distillée ;
- Ajouter 75 µl de NaNO2 ;
- Ajouter 150 μl d’AlCl3.6H2O après 6 minutes ;
- 5 minutes plus tard, ajouter 0,5 ml de NaOH 1 M ;
- Ajuster le volume à 2,5 ml avec l’eau distillée ;
- Secouer pendant 10 secondes ;
- Mesurer l'absorbance sans attendre à 510 nm contre un blanc.
Les résultats sont exprimés en milligramme d’équivalents Quercétine par g d’extrait sec (mg EQ/g
d’extrait).
Courbe d’étalonnage de la Quercétine
La courbe d’étalonnage est effectuée par Quercétine à différentes concentrations de 2 à 45 mg/l,
dans les mêmes conditions et les mêmes étapes du dosage. Les résultats sont ainsi exprimés en
milligramme d’équivalents de Quercétine par gramme de matière végétale sèche. (Ce travail est
effectué en collaboration avec des étudiants de l’ENSA vue le manque de produit à l’école).
Les étapes de dosage des flavonoïdes totaux sont résumées dans le schéma récapitulatif suivant
(Figure II. 7).