Chapitre II : Matériel et méthodes
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la forme anionique (liée) du colorant est bleue avec un spectre d'absorption maximal situé à
595 nm et la forme cationique (libre) du colorant de couleur rouge et brune avec un spectre
d'absorption compris entre 465 et 470 nm ce qui explique le changement de couleur du brun au
bleu en présence de protéines. La protéine albumine bovine sérique est utilisée pour
l’élaboration de la courbe étalon.
Le dosage de protéines a été effectué selon le mode opératoire suivant :
- Une série de 14 tubes à essais énumérés pour la gamme et les échantillons a été
préparée ;
- Une solution de BSA à 1% a été préparée ;
- Les échantillons (poudre de carapaces de crevettes) ont été dissouts dans un volume
d’eau distillée déterminé ;
- Des volumes croissants de BSA ont été introduits dans les tubes de la gamme dans
une fourchette de 0 à 100 µl ;
- Les tubes d’échantillons sont remplis par les échantillons préalablement dissouts ;
- Ajouter un volume déterminer du réactif de Bradford dans chaque tube (gamme
étalon et échantillons)
- Le mélange est incubé à l’abri de la lumière à une température ambiante pendant 10
minutes ;
- Un volume de chaque mélange a été prélevé après incubation est mis dans la cuve de
photospectromètre ;
- La lecture a été réalisée à une longueur d’onde de 595 nm.
Les valeurs obtenues à partir des tubes de la gamme étalon permettent de tracer une droite
étalon A= f [protéines]. Cette proportionnalité nous permet de déduire la proportion de
protéines contenue dans les carapaces de crevettes.