Matériel et Méthodes
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 Technique de coloration de Gram:
a) Préparation du frottis:
 Poser une goutte d'eau distillée sur une lame propre, prélever une parcelle d'une
colonie bactérienne isolée et l'étaler sur la lame,
 Sécher en approchant la lame de 15-20 cm au-dessus de la flamme du bec bunsen.
b) Fixation:
 Tenir la lame avec une pince et la passer trois fois à la flamme.
c) Coloration de Gram :
-Coloration primaire:
 Couvrir la lame avec du violet de gentiane et laisser agir 1 min, jeter l'excès de
colorant ;
 Mordançage : Egoutter sans rincer et faire deux bains de Lugol dont chacun dure 45
secondes. ;
 Décoloration: Egoutter et plonger la lame dans l'alcool durant 15 secondes ;
 Rincer doucement et abondamment à l'eau distillée.
- Coloration secondaire :
 recolorer les germes décolorés avec la fuchsine pendant 1 min ;
 Laver à l'eau distillée et sécher la lame au-dessus de la flamme du bec bunsen.
d) Observation microscopique :
Observer à l'objectif à immersion (G 40 x 10)
 Les bactéries colorées en violet sont les bactéries à Gram+
 Les bactéries colorées en rose sont les bactéries à Gram-