Matériel et méthodes
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IV.2. Identification des différents pigments de la spiruline par séparation sur couche mince
(CCM)
La chromatographie sur couche mince utilisée dans notre travail pour identifier les différents
pigments contenus dans notre spiruline, a été réalisée au niveau du laboratoire LBCM2 de
l‟ENSSMAL.
IV.3. Séparation des pigments de la spiruline sur couches imprégnées par l’huile de paraffine
(AISSOU, 2020)
Principe
Dans notre cas, on parle de chromatographie de partage du fait qu‟on se trouve en présence d‟une
phase stationnaire non polaire (paraffine liée au support) et une phase mobile polaire (solvant).
La phase stationnaire est composée d‟une couche solide sur laquelle est déposé un gel de silice
servant de support et la phase mobile est constituée d‟un éluant qui sépare les différents pigments.
Plusieurs gouttes de solution de pigments : caroténoïdes, chlorophylles et phycocyanine sont
déposées sur la phase stationnaire à l‟aide d‟une micropipette pour former des taches. La plaque de
silice est mise en contact avec la phase mobile qui va migrer et entrainer les pigments par capillarité.
Une fois que la migration est terminée, on obtient plusieurs taches colorées sur la plaque de silice
correspondantes aux différents composants des pigments.
Mode opératoire
-On plonge une plaque chromatographique prête à l‟emploi dans une cuve contenant une solution
de l‟huile de paraffine épaisse à 8% dans l‟éther de pétrole.
- A 3 cm du bord supérieur du front, on stoppe l‟imprégnation.
-On laisse la plaque séchée 24 h environ à l‟air libre (pour que l‟éther de pétrole soit éliminé
complètement avant la chromatographie). Puis la découper en deux bandes 15cm de long et 8cm de
large.
-On trace 2 cm dans les parties non imprégnées sur lesquelles on dépose une goutte de chaque
solution de pigments à l‟aide d‟une micropipette, le séchage se fait à l‟air libre.
-Par la suite, on plonge les deux bandes dans des cuves en position verticale contenant deux
systèmes de solvants bien déterminés : méthanol/acétone (5;2), et méthanol/acétone/eau (20 ; 4 ; 3)
à 1cm du bord inferieur des plaques (parties non imprégnées), puis on ferme les cuves pour qu‟elles
soient saturées de vapeurs des solvants.
-On arrête la migration à 10 cm du bord supérieur (front de solvant), on laisse sécher à l‟air libre.
-On cercle chaque tache et on pointe son centre à partir duquel on calcule le rapport frontal (RF).
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IV.2. Identification des différents pigments de la spiruline par séparation sur couche mince
(CCM)
La chromatographie sur couche mince utilisée dans notre travail pour identifier les différents
pigments contenus dans notre spiruline, a été réalisée au niveau du laboratoire LBCM2 de
l‟ENSSMAL.
IV.3. Séparation des pigments de la spiruline sur couches imprégnées par l’huile de paraffine
(AISSOU, 2020)
Principe
Dans notre cas, on parle de chromatographie de partage du fait qu‟on se trouve en présence d‟une
phase stationnaire non polaire (paraffine liée au support) et une phase mobile polaire (solvant).
La phase stationnaire est composée d‟une couche solide sur laquelle est déposé un gel de silice
servant de support et la phase mobile est constituée d‟un éluant qui sépare les différents pigments.
Plusieurs gouttes de solution de pigments : caroténoïdes, chlorophylles et phycocyanine sont
déposées sur la phase stationnaire à l‟aide d‟une micropipette pour former des taches. La plaque de
silice est mise en contact avec la phase mobile qui va migrer et entrainer les pigments par capillarité.
Une fois que la migration est terminée, on obtient plusieurs taches colorées sur la plaque de silice
correspondantes aux différents composants des pigments.
Mode opératoire
-On plonge une plaque chromatographique prête à l‟emploi dans une cuve contenant une solution
de l‟huile de paraffine épaisse à 8% dans l‟éther de pétrole.
- A 3 cm du bord supérieur du front, on stoppe l‟imprégnation.
-On laisse la plaque séchée 24 h environ à l‟air libre (pour que l‟éther de pétrole soit éliminé
complètement avant la chromatographie). Puis la découper en deux bandes 15cm de long et 8cm de
large.
-On trace 2 cm dans les parties non imprégnées sur lesquelles on dépose une goutte de chaque
solution de pigments à l‟aide d‟une micropipette, le séchage se fait à l‟air libre.
-Par la suite, on plonge les deux bandes dans des cuves en position verticale contenant deux
systèmes de solvants bien déterminés : méthanol/acétone (5;2), et méthanol/acétone/eau (20 ; 4 ; 3)
à 1cm du bord inferieur des plaques (parties non imprégnées), puis on ferme les cuves pour qu‟elles
soient saturées de vapeurs des solvants.
-On arrête la migration à 10 cm du bord supérieur (front de solvant), on laisse sécher à l‟air libre.
-On cercle chaque tache et on pointe son centre à partir duquel on calcule le rapport frontal (RF).