Chapitre Ⅲ : matériel et méthodes
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Une fois la séparation finit on met un flacon dans lequel on veut récupérer le pétrole brut, on
ouvre le robinet et on laisse passer que le pétrole contenu dans le dichlorométhane visiblement
reconnu par sa couleur foncée et on referme le robinet, puis dans un bécher on récupère le milieu
transparent qu’on va jeter par la suite.
Une fois la phase organique récupérée, elle est desséchée avec du Na2SO4 anhydre, les
hydrocarbures (HAP et alcanes) sont analysés par Chromatographie en phase gazeusespectrométrie de masse CG-SM (QP5050 SHIMADZU), avec les conditions opératoires
suivantes : Le gaz porteur, utilisé à un débit de 1 ml/min, est l’hélium. La température de
l’injecteur a été fixée à 250 °C. Le programme du gradient de la température est comme suit : 2
min à 50 °C, puis la température augmente jusqu’atteindre 280 °C à raison de 5 °C/min et se
stabilise à cette température pendant 15 min. L’injection se fait en mode Split 1/52, le volume
injecté est 1 μL. Le pourcentage de biodégradation des souches testées est calculé en incluant les
valeurs résiduelles en GC-SM et le témoin abiotique. Cela correspond au rapport entre la quantité
de substrat dosée par GC-SM dans les essais et le substrat présent dans les témoins abiotiques à la
fin de la période d’incubation et la quantité de substrat initialement introduite afin de valider
l’expérience.
Figure Ⅲ.15. a) Décantation de la fraction contenant le pétrole vers le bas de l’ampoule
b) Récupération du dichlorométhane contenant le pétrole dans un flacon stérile
b
a
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Une fois la séparation finit on met un flacon dans lequel on veut récupérer le pétrole brut, on
ouvre le robinet et on laisse passer que le pétrole contenu dans le dichlorométhane visiblement
reconnu par sa couleur foncée et on referme le robinet, puis dans un bécher on récupère le milieu
transparent qu’on va jeter par la suite.
Une fois la phase organique récupérée, elle est desséchée avec du Na2SO4 anhydre, les
hydrocarbures (HAP et alcanes) sont analysés par Chromatographie en phase gazeusespectrométrie de masse CG-SM (QP5050 SHIMADZU), avec les conditions opératoires
suivantes : Le gaz porteur, utilisé à un débit de 1 ml/min, est l’hélium. La température de
l’injecteur a été fixée à 250 °C. Le programme du gradient de la température est comme suit : 2
min à 50 °C, puis la température augmente jusqu’atteindre 280 °C à raison de 5 °C/min et se
stabilise à cette température pendant 15 min. L’injection se fait en mode Split 1/52, le volume
injecté est 1 μL. Le pourcentage de biodégradation des souches testées est calculé en incluant les
valeurs résiduelles en GC-SM et le témoin abiotique. Cela correspond au rapport entre la quantité
de substrat dosée par GC-SM dans les essais et le substrat présent dans les témoins abiotiques à la
fin de la période d’incubation et la quantité de substrat initialement introduite afin de valider
l’expérience.
Figure Ⅲ.15. a) Décantation de la fraction contenant le pétrole vers le bas de l’ampoule
b) Récupération du dichlorométhane contenant le pétrole dans un flacon stérile
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