CHAPITRE II : Matériels et méthodes
51
II.4.2.3. Préparations expérimentale :
a) Préparation des boîtes de Pétri de MH :
Le milieu retenu pour la majorité des espèces bactériennes est celui de Mueller Hinton. Toujours
en milieu stérile, le milieu MH a été coulé dans des boîtes de Pétri a une épaisseur de 4 mm, puis
séchée dans une étuve à 37°C - 40 °C avant l’emploi pour éliminer toute trace d’humidité.
b) Préparation des disques :
Les disques de 6mm de papier filtre Whatman ont été découpés et stérilisés dans un autoclave à
121°C pendant 15min.
c) Préparation des solutions :
La solution du témoin positif (antibiotique) : 1g d’antibiotique (Amoxicilline 1g) dans
10 ml d’eau physiologique stérile.
La solution du témoin négatif (eau physiologique stérile) : solution saline 9g/L de
NaCl stérilisée dans l’autoclave en 121°C pendant 15min.
La solution de l’extrait de polysaccharide : 1g de polysaccharide dans 10ml d’eau
physiologique stérile.
La solution de l’extrait de polyphénols.
Les suspensions bactériennes : prélèvement d’un anneau de l’anse de platine du tube de
souche jeune (revivifiées auparavant en préparation) dans 10ml d’eau physiologique
stérile.
II.4.2.4. Mode opératoire :
L’ensemencement de l’inoculum est réalisé par écouvillonnage de la surface de chaque boîte de
pétri, puis tous les disques imprégnés des solutions préparées auparavant ont été déposées
délicatement avec une pince stérile sur le milieu gélosé ensemencé préalablement avec une
suspension bactérienne des souches testées. Après 24h d'incubation à 37°C, le diamètre des
zones claires d'inhibition est mesuré autour de chaque disque (Lesueur et al., 2007 ;
Boulekbach-mkhlouf, 2013).
La lecture des résultats peut être représentée par des signes selon la sensibilité des souches vis-àvis des extraits classés par le diamètre des halos d'inhibition (Tableau II.2) (Benkiki, 2006 ;
Ponce et al., 2003 ; Frouhat et Lahcini, 2013 ; Degaa et Latreche, 2019).
51
II.4.2.3. Préparations expérimentale :
a) Préparation des boîtes de Pétri de MH :
Le milieu retenu pour la majorité des espèces bactériennes est celui de Mueller Hinton. Toujours
en milieu stérile, le milieu MH a été coulé dans des boîtes de Pétri a une épaisseur de 4 mm, puis
séchée dans une étuve à 37°C - 40 °C avant l’emploi pour éliminer toute trace d’humidité.
b) Préparation des disques :
Les disques de 6mm de papier filtre Whatman ont été découpés et stérilisés dans un autoclave à
121°C pendant 15min.
c) Préparation des solutions :
La solution du témoin positif (antibiotique) : 1g d’antibiotique (Amoxicilline 1g) dans
10 ml d’eau physiologique stérile.
La solution du témoin négatif (eau physiologique stérile) : solution saline 9g/L de
NaCl stérilisée dans l’autoclave en 121°C pendant 15min.
La solution de l’extrait de polysaccharide : 1g de polysaccharide dans 10ml d’eau
physiologique stérile.
La solution de l’extrait de polyphénols.
Les suspensions bactériennes : prélèvement d’un anneau de l’anse de platine du tube de
souche jeune (revivifiées auparavant en préparation) dans 10ml d’eau physiologique
stérile.
II.4.2.4. Mode opératoire :
L’ensemencement de l’inoculum est réalisé par écouvillonnage de la surface de chaque boîte de
pétri, puis tous les disques imprégnés des solutions préparées auparavant ont été déposées
délicatement avec une pince stérile sur le milieu gélosé ensemencé préalablement avec une
suspension bactérienne des souches testées. Après 24h d'incubation à 37°C, le diamètre des
zones claires d'inhibition est mesuré autour de chaque disque (Lesueur et al., 2007 ;
Boulekbach-mkhlouf, 2013).
La lecture des résultats peut être représentée par des signes selon la sensibilité des souches vis-àvis des extraits classés par le diamètre des halos d'inhibition (Tableau II.2) (Benkiki, 2006 ;
Ponce et al., 2003 ; Frouhat et Lahcini, 2013 ; Degaa et Latreche, 2019).