94_____________________________________Biochimie clinique
5. Méthodes de dosage
5.1. Dosage de la calcémie
5.1.1. Méthodes calorimétriques
Elles utilisent différentes substances qui complexent le calcium en formant un
dérivé dont la coloration est proportionnelle à la concentration de calcium de
l'échantillon à doser. Il est nécessaire d'éliminer l'interférence du magnésium
en utilisant l'hydroxyquinoléïne et en travaillant à pH alcalin.
Ces méthodes se prêtent bien à une adaptation sur les appareils automatiques
multiparamétriques de biochimie.
5.1.1.1. Orthocrésolphtaléine
L'orthocrésolphtaléine complexon se complexe en milieu alcalin avec le
calcium pour donner un dérivé rouge présentant un maximum d'absorption à
575 nm.
5.1.1.2. Bleu de méthyl thymol
Ce réactif chélate le calcium et vire au bleu avec un maximum d'absorption à
612 nm.
5.1.1.3. Arsenazo III
Le complexe coloré en noir présente un maximum d'absorption à 680 nm.
5.7.2. Méthodes physiques
5.1.2.1. Spectrophotométrie d'absorption atomique
C'est actuellement la méthode de référence pour le dosage du calcium.
La longueur d'onde utilisée est de 422,7 nm et la technique demande le rajout
de chlorure de lanthane pour éviter l'interférence des phosphates.
Ce dosage s'effectue sur un appareillage onéreux, et peu de laboratoires de
biochimie de routine l'emploient.
Le schéma de principe d'un spectrophotomètre d'absorption atomique est
présenté sur la figure 3.13.
Un faisceau lumineux spécifique émis par la lampe à cathode creuse est
absorbé par les atomes de calcium de l'échantillon qui ont été amenés sur son
trajet par le générateur de vapeur atomique. Il existe un rapport entre le nombre
d'atomes ayant absorbé et l'intensité du faisceau après le générateur. Le monochromateur sélectionne la longueur d'onde du dosage (ici 422,7 nm). Le modulateur permet d'éliminer certaines émissions parasites indésirables. Le photo-
5. Méthodes de dosage
5.1. Dosage de la calcémie
5.1.1. Méthodes calorimétriques
Elles utilisent différentes substances qui complexent le calcium en formant un
dérivé dont la coloration est proportionnelle à la concentration de calcium de
l'échantillon à doser. Il est nécessaire d'éliminer l'interférence du magnésium
en utilisant l'hydroxyquinoléïne et en travaillant à pH alcalin.
Ces méthodes se prêtent bien à une adaptation sur les appareils automatiques
multiparamétriques de biochimie.
5.1.1.1. Orthocrésolphtaléine
L'orthocrésolphtaléine complexon se complexe en milieu alcalin avec le
calcium pour donner un dérivé rouge présentant un maximum d'absorption à
575 nm.
5.1.1.2. Bleu de méthyl thymol
Ce réactif chélate le calcium et vire au bleu avec un maximum d'absorption à
612 nm.
5.1.1.3. Arsenazo III
Le complexe coloré en noir présente un maximum d'absorption à 680 nm.
5.7.2. Méthodes physiques
5.1.2.1. Spectrophotométrie d'absorption atomique
C'est actuellement la méthode de référence pour le dosage du calcium.
La longueur d'onde utilisée est de 422,7 nm et la technique demande le rajout
de chlorure de lanthane pour éviter l'interférence des phosphates.
Ce dosage s'effectue sur un appareillage onéreux, et peu de laboratoires de
biochimie de routine l'emploient.
Le schéma de principe d'un spectrophotomètre d'absorption atomique est
présenté sur la figure 3.13.
Un faisceau lumineux spécifique émis par la lampe à cathode creuse est
absorbé par les atomes de calcium de l'échantillon qui ont été amenés sur son
trajet par le générateur de vapeur atomique. Il existe un rapport entre le nombre
d'atomes ayant absorbé et l'intensité du faisceau après le générateur. Le monochromateur sélectionne la longueur d'onde du dosage (ici 422,7 nm). Le modulateur permet d'éliminer certaines émissions parasites indésirables. Le photo-