7 – UTILISATION D'ISOTOPES POUR L'ÉTUDE DES MÉCANISMES ENZYMATIQUES
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que les cinétiques n'obéissent pas au modèle de MICHAELIS et MENTEN vis-à-vis
du glucose et qu'en conséquence les expériences conventionnelles d'inhibition par
le produit soient difficiles à analyser, des mesures des flux chimiques du glucose
6-phosphate vers l'ATP et le glucose ont donné les résultats présentés dans la
figure 7.3 : exactement les résultats attendus sur la base de l'équation [7.13] si le
glucose est le substrat qui se fixe en premier.
0
01234
6
[ATP] (mM)
F (Glucose-6P → ATP)
F (Glucose-6P → Glucose)
[Glucose] (mM)
5
0
5
10
15
20
50
25
0
1
2
2
4
6
8
10
12
F (Glucose-6P → Glucose)
F (Glucose-6P → ATP)
a
b
7.3 - Mesures de flux chimiques pour l'hexokinase D
La figure montre les données de GREGORIOU, TRAYER et CORNISH-BOWDEN (1981) pour le
transfert simultané de
32
P vers l'ATP et de
14 C vers le glucose à partir de glucose6-phosphate marqué avec le
14 C et le
32
P. La théorie prédit une variation du rapport des flux
chimiques avec la concentration du substrat qui se fixe en second dans une réaction
ordonnée, mais aucune variation avec le substrat qui se fixe en premier, comme le montrent
respectivement les parties (a) et (b) de la figure.
7.5.2. Cinétiques d'isomérisation
Nous pourrions supposer que les types les plus simples d'expérience cinétique
seraient appropriés avec les isomérases (qui incluent les mutases, les racémases, les
épimérases…), puisque ces enzymes catalysent d'authentiques réactions à un
substrat et un produit. Néanmoins, les isomérases présentent une difficulté spéciale
qui est évidente quand elle est soulignée, mais qui peut facilement être négligée :
il est impossible de réaliser des expériences conventionnelles d'inhibition par le