6 – RÉACTIONS À PLUSIEURS SUBSTRATS
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saturation. La même analyse appliquée à l'équation [6.41] montre que le terme
constant continue à dépendre de [] Q lorsque [] B est grande ; ainsi Q reste un
inhibiteur compétitif vis-à-vis de A lorsque la fixation de B s'approche de la
saturation. Ces résultats, ainsi que ceux correspondants obtenus pour les autres
combinaisons de substrats et de produits sont présentés dans le tableau 6.4.
Il est aisé de prédire les caractéristiques de l'inhibition par le produit pour n'importe
quel mécanisme. La méthode la plus fiable consiste à étudier la forme de l'équation
complète de vitesse, mais il est généralement possible d'obtenir les résultats par
inspection du mécanisme en utilisant la méthode de KING et ALTMAN, comme
décrit dans le § 6.3.6. Pour chaque combinaison de produit et de substrat variable,
il faut rechercher le profil de KING et ALTMAN qui donne un terme contenant la
concentration de produit mais pas la concentration de substrat variable ; si cela est
possible, la concentration de produit doit se trouver dans la partie constante du
dénominateur et il doit y avoir une composante compétitive dans l'inhibition. Il faut
alors chercher dans un profil de KING et ALTMAN un terme qui contienne à la fois
la concentration du produit et celle du substrat variable ; si cela est possible, la
concentration de produit doit apparaître dans la partie variable du dénominateur et
il doit y avoir une composante « anti-compétitive » dans l'inhibition. En disposant
de cette information, il devient simple de déterminer le type d'inhibition. En
recherchant le profil de KING et ALTMAN utilisable, il faut se rappeler que les
étapes de libération du produit sont irréversibles si le produit en question n'est pas
présent dans le mélange réactionnel.
Dans une réaction à deux produits, l'inhibition anti-compétitive est largement
limitée au cas mentionné, l'inhibition par le premier produit dans un mécanisme
séquentiel compétitif quand la saturation par le second substrat est atteinte. Elle
devient plus commune dans les réactions générant trois produits et plus, et a lieu
avec au moins un des produits dans tous les mécanismes ordonnés à complexe
ternaire de ce type (§ 6.9).
6.8. PRÉPARATION DES EXPÉRIENCES
La mise au point d'une expérience pour étudier une réaction à deux substrats en
absence de phénomène d'inhibition repose sur des principes similaires à ceux
utilisés pour l'étude des inhibitions simples (§ 5.7). Les valeurs des constantes de
MICHAELIS et des constantes d'inhibition pour les différents substrats ne sont
évidemment pas connues à l'avance, et des tests préliminaires doivent être réalisés.
Quelques expériences réalisées dans des conditions où la concentration d'un des
substrats est modifiée pour deux concentrations données de l'autre substrat, une
aussi grande que possible et une aussi faible que possible, devraient permettre de
déterminer la gamme de concentrations dans laquelle se situe la valeur du K m pour
le premier substrat. Une fois cette gamme connue, des concentrations de substrats
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saturation. La même analyse appliquée à l'équation [6.41] montre que le terme
constant continue à dépendre de [] Q lorsque [] B est grande ; ainsi Q reste un
inhibiteur compétitif vis-à-vis de A lorsque la fixation de B s'approche de la
saturation. Ces résultats, ainsi que ceux correspondants obtenus pour les autres
combinaisons de substrats et de produits sont présentés dans le tableau 6.4.
Il est aisé de prédire les caractéristiques de l'inhibition par le produit pour n'importe
quel mécanisme. La méthode la plus fiable consiste à étudier la forme de l'équation
complète de vitesse, mais il est généralement possible d'obtenir les résultats par
inspection du mécanisme en utilisant la méthode de KING et ALTMAN, comme
décrit dans le § 6.3.6. Pour chaque combinaison de produit et de substrat variable,
il faut rechercher le profil de KING et ALTMAN qui donne un terme contenant la
concentration de produit mais pas la concentration de substrat variable ; si cela est
possible, la concentration de produit doit se trouver dans la partie constante du
dénominateur et il doit y avoir une composante compétitive dans l'inhibition. Il faut
alors chercher dans un profil de KING et ALTMAN un terme qui contienne à la fois
la concentration du produit et celle du substrat variable ; si cela est possible, la
concentration de produit doit apparaître dans la partie variable du dénominateur et
il doit y avoir une composante « anti-compétitive » dans l'inhibition. En disposant
de cette information, il devient simple de déterminer le type d'inhibition. En
recherchant le profil de KING et ALTMAN utilisable, il faut se rappeler que les
étapes de libération du produit sont irréversibles si le produit en question n'est pas
présent dans le mélange réactionnel.
Dans une réaction à deux produits, l'inhibition anti-compétitive est largement
limitée au cas mentionné, l'inhibition par le premier produit dans un mécanisme
séquentiel compétitif quand la saturation par le second substrat est atteinte. Elle
devient plus commune dans les réactions générant trois produits et plus, et a lieu
avec au moins un des produits dans tous les mécanismes ordonnés à complexe
ternaire de ce type (§ 6.9).
6.8. PRÉPARATION DES EXPÉRIENCES
La mise au point d'une expérience pour étudier une réaction à deux substrats en
absence de phénomène d'inhibition repose sur des principes similaires à ceux
utilisés pour l'étude des inhibitions simples (§ 5.7). Les valeurs des constantes de
MICHAELIS et des constantes d'inhibition pour les différents substrats ne sont
évidemment pas connues à l'avance, et des tests préliminaires doivent être réalisés.
Quelques expériences réalisées dans des conditions où la concentration d'un des
substrats est modifiée pour deux concentrations données de l'autre substrat, une
aussi grande que possible et une aussi faible que possible, devraient permettre de
déterminer la gamme de concentrations dans laquelle se situe la valeur du K m pour
le premier substrat. Une fois cette gamme connue, des concentrations de substrats