168
CINÉTIQUE ENZYMATIQUE
K
K
K
K
m
m
m
i
=
+
exp
exp
1
[5.38]
V
K
V
K
m
exp
m
exp
=
[5.39]
Ainsi ce mécanisme obéit à l’équation de MICHAELIS et MENTEN, et les cinétiques
observées ne fournissent aucune indication sur l’importance de la fixation nonproductive. Malheureusement, les valeurs qui ont un intérêt pour l’expérience, sont
généralement celles qui concernent le chemin productif. Les valeurs mesurées, V et
K m , peuvent être plus petites, d’une quantité inconnue et non-mesurable, que les
grandeurs recherchées. Seul le paramètre VK m donne une mesure correcte des
propriétés catalytiques de l’enzyme.
Pour les enzymes hautement spécifiques, une fixation non-spécifique s’avère peu
plausible et peut donc être exclue, mais pour les enzymes non-spécifiques, comme la
chymotrypsine, la comparaison des résultats obtenus avec plusieurs substrats peut
parfois fournir une preuve de l’existence d’un tel phénomène. Ainsi par exemple,
INGLES et KNOWLES (1967) ont mesuré les vitesses d’hydrolyse d’une série d’acylchymotrypsines, en mesurant des valeurs de k 0 pour l’hydrolyse catalysée par la
chymotrypsine des esters de p-nitrophénol correspondants, dans laquelle l’étape de
déacylation, c’est-à-dire d’hydrolyse de l’intermédiaire acyl-chymotrypsine, est l’étape
qui limite la vitesse.
Tableau 5.4 - Complexes non-productifs dans la catalyse par la chymotrypsine
Groupe acyle
k 0 (s
–1
)
k OH
− (M
–1 s
–1
)
k
k OH
0
−
(M)
Acétyl-D-tryptophanyl52
95
5,0
0,30
0,034
0,015
0,0028
0,16
0,54
0,35
0,51
0,35
0,54
0,16
330
150
14
0,58
0,097
0,027
0,018
Le tableau montre des données d’INGLES et de KNOWLES (1967) pour l’hydrolyse catalysée
par la chymotrypsine d’esters de p-nitrophénol de divers acides aminés acétylés. Pour
ces substrats, l’hydrolyse des acétyl-amino-acyl-chymotrypsines correspondantes limite
la vitesse, et donc les valeurs mesurées de la constante catalytique k 0 sont en réalité
des constantes de premier ordre pour cette réaction d’hydrolyse. Les valeurs sont
comparées avec les constantes de vitesse de second ordre k OH – pour l’hydrolyse catalysée
par la base des esters de p-nitrophénol des dérivés benzyloxycarbonyles des acides aminés
correspondants.
CINÉTIQUE ENZYMATIQUE
K
K
K
K
m
m
m
i
=
+
exp
exp
1
[5.38]
V
K
V
K
m
exp
m
exp
=
[5.39]
Ainsi ce mécanisme obéit à l’équation de MICHAELIS et MENTEN, et les cinétiques
observées ne fournissent aucune indication sur l’importance de la fixation nonproductive. Malheureusement, les valeurs qui ont un intérêt pour l’expérience, sont
généralement celles qui concernent le chemin productif. Les valeurs mesurées, V et
K m , peuvent être plus petites, d’une quantité inconnue et non-mesurable, que les
grandeurs recherchées. Seul le paramètre VK m donne une mesure correcte des
propriétés catalytiques de l’enzyme.
Pour les enzymes hautement spécifiques, une fixation non-spécifique s’avère peu
plausible et peut donc être exclue, mais pour les enzymes non-spécifiques, comme la
chymotrypsine, la comparaison des résultats obtenus avec plusieurs substrats peut
parfois fournir une preuve de l’existence d’un tel phénomène. Ainsi par exemple,
INGLES et KNOWLES (1967) ont mesuré les vitesses d’hydrolyse d’une série d’acylchymotrypsines, en mesurant des valeurs de k 0 pour l’hydrolyse catalysée par la
chymotrypsine des esters de p-nitrophénol correspondants, dans laquelle l’étape de
déacylation, c’est-à-dire d’hydrolyse de l’intermédiaire acyl-chymotrypsine, est l’étape
qui limite la vitesse.
Tableau 5.4 - Complexes non-productifs dans la catalyse par la chymotrypsine
Groupe acyle
k 0 (s
–1
)
k OH
− (M
–1 s
–1
)
k
k OH
0
−
(M)
Acétyl-D-tryptophanyl52
95
5,0
0,30
0,034
0,015
0,0028
0,16
0,54
0,35
0,51
0,35
0,54
0,16
330
150
14
0,58
0,097
0,027
0,018
Le tableau montre des données d’INGLES et de KNOWLES (1967) pour l’hydrolyse catalysée
par la chymotrypsine d’esters de p-nitrophénol de divers acides aminés acétylés. Pour
ces substrats, l’hydrolyse des acétyl-amino-acyl-chymotrypsines correspondantes limite
la vitesse, et donc les valeurs mesurées de la constante catalytique k 0 sont en réalité
des constantes de premier ordre pour cette réaction d’hydrolyse. Les valeurs sont
comparées avec les constantes de vitesse de second ordre k OH – pour l’hydrolyse catalysée
par la base des esters de p-nitrophénol des dérivés benzyloxycarbonyles des acides aminés
correspondants.