ANNEXES
II
Annexe II :
Extraction et dosage des protéines :
Principe : La méthode s’effectue en trois étapes :
- Digestion ou minéralisation de l’échantillon ;
- Distillation de l’ammoniac ;
- Titrage de l’ammoniac.
Mode opératoire :
 Minéralisation : elle permet de dénaturer les protéines (casser les liaisons) et de libérer les acides aminés
ensuite transformer l’azote organique en azote minéral.
Elle est effectuée à l’aide d’un appareil de minéralisation « InKjel » équipé d’une plaque chauffante, un
thermostat un porte matras, un collecteur et un piégeur de fumées.
Dans un matras de Kjeldahl, on met :
- 2g d’Azolla séchée, 7g de sulfate de sodium Na2SO4, 5g de sélénium Se, et 1 ml de péroxyde
d’hydrogène (H2O2) à 60 %, 10 ml d’acide sulfurique concentré (H2SO4), et 2 à 3 petits morceaux de
pierre ponce.
- On agite et on place le matras dans le dispositif de minéralisation.
- On chauffe doucement et progressivement jusqu'à l’apparition des fumées noires.
- On poursuit le chauffage durant 6h, jusqu’à l’obtention d’une couleur limpide. A la fin de minéralisation
on laisse les matras refroidir.
 Filtration et dilution du minéralisât :
- Apres refroidissement des matras, on filtre chaque minéralisât dans un erlenmeyer. On lave les matras
et on filtre aussi cette eau de rinçage.
- On ajuste à 100 ml avec l’eau distillé.
- On transvase les minéralisas filtrés et dilués dans les erlenmeyers colorés en bruin à bouchon, étiquetés
et on les conserve au réfrigérateur à 4°C.
 Distillation :
- On prélève dans un matras de Kjeldahl 20 ml du minéralisât filtré et dilué pour la distillation. Ensuite
en place le matras dans l’appareil de distillation « Behr, Labor-Technik ».
- A l’aide d’un bouton on ajoute 40 ml de soude (NaOH) à 40% dans le matrats et on débute la distillation.
- On recueille le distillat (ammoniaque entainé à la vapeur) dans un erlenmeyer de collecte, contentant
20 ml d’acide borique à 4%, dont le pH a été préalablement déterminé.
- On continue la distillation jusqu’à obtenir 100 ml de solution (acide borique + ammoniaque entrainé à
la vapeur), l’opération dure de 5 à 10 min. On prélève de nouveau le pH.
 Titrage
- On rajoute au distillat obtenu, 10 gouttes de la solution d’indicateur de « Tashiro ».
- On titre directement la solution obtenue par une solution d’acide borique.
 Le calcul
Le taux de protéines est calculé selon l’équation suivante :
% 𝑷𝒓𝒐𝒕é𝒊𝒏𝒆𝒔 =
𝟐, 𝟖𝟎𝟑 ∗ 𝑽 ∗ 𝟏𝟎𝟎
𝟏𝟎𝟎𝟎 ∗ 𝒎
∗ 𝑭