Chapitre II : Matériels et Méthodes
30
Où h tot : équivaut à 8,6 meq/kg de protéines (Adler-Nissen, 1986) et h : correspond au nombre de
liaisons peptidiques coupées pendant hydrolyse enzymatique.
Selon Adler-Nissen (1977), quand le pH réactionnel est au-dessus du pKa du groupement αNH2, le DH est obtenu suivant l’équation :
%DH = (h/h tot ) × 100 = (BN b / α h tot MP) × 100
Où B : représente la quantité de base en ml ; Nb : la normalité de la base ; α : le facteur de
dissociation du groupement α-NH2 et MP : la masse de protéines en grammes.
Le degré de dissociation α est estimé suivant la formule :
α = (10
pH - pk ) / (1 + 10
pH - pk )
Le pK à différentes températures (Kelvin) est calculé selon l’équation suivante (Steinhardt et
Beychock, 1964)
II.2.5.4. Caractérisation biochimique
La caractérisation biochimique est effectuée sur la poudre de déchet des crevettes, les
hydrolysats protéiques résultats de deux techniques, ainsi que deux culots. Avant les analyses,
les échantillons sont tous lyophilisés.
II.2.5.4.1. Dosage des protéines
Méthode de Kjeldahl
Cette méthode est réalisée au niveau du laboratoire biochimie marine 2 à L’ENSSMAL, et le
protocole utilisé est celui décrit par Dr. AKROUR-Aissou (2019)
Principe
La caractérisation par la méthode Kjeldahl permet de déterminer la teneur en protéines totales
d’échantillon par le dosage de l'azote contenu dans celui-ci. Il s’effectue en trois étapes.
Manipulation
Minéralisation :
2g de chaque échantillon sont placés dans cinq matras de Kjeldahl et un autre pour le blanc,
ensuite 7g de sulfate de potassium (K 2 SO 4 ), 5 mg de sélénium (Se) catalyseur de la réaction, 1
mL de peroxyde d’hydrogène (H 2 O 2 ) à 60 , 10 mL d’acide sulfurique (H 2 SO 4 ) et 2-3 petits
morceaux de pierre ponce sont ajoutés. Les matras sont placés dans le dispositif de
minéralisation et chauffés progressivement jusqu’à l’apparition des fumés noires (pendant 3
30
Où h tot : équivaut à 8,6 meq/kg de protéines (Adler-Nissen, 1986) et h : correspond au nombre de
liaisons peptidiques coupées pendant hydrolyse enzymatique.
Selon Adler-Nissen (1977), quand le pH réactionnel est au-dessus du pKa du groupement αNH2, le DH est obtenu suivant l’équation :
%DH = (h/h tot ) × 100 = (BN b / α h tot MP) × 100
Où B : représente la quantité de base en ml ; Nb : la normalité de la base ; α : le facteur de
dissociation du groupement α-NH2 et MP : la masse de protéines en grammes.
Le degré de dissociation α est estimé suivant la formule :
α = (10
pH - pk ) / (1 + 10
pH - pk )
Le pK à différentes températures (Kelvin) est calculé selon l’équation suivante (Steinhardt et
Beychock, 1964)
II.2.5.4. Caractérisation biochimique
La caractérisation biochimique est effectuée sur la poudre de déchet des crevettes, les
hydrolysats protéiques résultats de deux techniques, ainsi que deux culots. Avant les analyses,
les échantillons sont tous lyophilisés.
II.2.5.4.1. Dosage des protéines
Méthode de Kjeldahl
Cette méthode est réalisée au niveau du laboratoire biochimie marine 2 à L’ENSSMAL, et le
protocole utilisé est celui décrit par Dr. AKROUR-Aissou (2019)
Principe
La caractérisation par la méthode Kjeldahl permet de déterminer la teneur en protéines totales
d’échantillon par le dosage de l'azote contenu dans celui-ci. Il s’effectue en trois étapes.
Manipulation
Minéralisation :
2g de chaque échantillon sont placés dans cinq matras de Kjeldahl et un autre pour le blanc,
ensuite 7g de sulfate de potassium (K 2 SO 4 ), 5 mg de sélénium (Se) catalyseur de la réaction, 1
mL de peroxyde d’hydrogène (H 2 O 2 ) à 60 , 10 mL d’acide sulfurique (H 2 SO 4 ) et 2-3 petits
morceaux de pierre ponce sont ajoutés. Les matras sont placés dans le dispositif de
minéralisation et chauffés progressivement jusqu’à l’apparition des fumés noires (pendant 3