Chapitre II
Matériel et méthodes
32
La lecture de ces réactions se fait à l'aide du Tableau de lecture.
➢ Préparation de la galerie
• Réunir fond et couvercle d'une boîte d'incubation et répartir environ 5 ml d'eau distillée ou
déminéralisée dans les alvéoles pour créer une atmosphère humide.
• Inscrire la référence de la souche sur la languette latérale de la boîte.
• Placer la galerie dans la boîte d'incubation.
➢ Préparation de l’inoculum
• Faire une suspension bactérienne dans un tube d’eau distillée stérile, d’opacité légère avec
une seule colonie pure prélevée sur un milieu gélosé.
➢ Inoculation de la galerie
• Remplir les tubes et les cupules des tests : CIT, VP, GEL avec la suspension bactérienne.
• Créer une anaérobiose dans les tests : ADH, LDC, ODC, URE, H2S en remplissant leur
cupule d’huile de paraffine.
• Remplir uniquement les tubes des autres tests.
• Refermer la boite d’incubation et la placer à 37 °C pendant 18 à 24 heures.
➢ Lecture
Les réactions produites pendant la période d’incubation se traduisent par des virages colorés,
sauf certaines sont révélées par l’addition de Réactifs :
VP : Ajouter les réactifs (VP I + VP II) puis attendre 10 min, une couleur rose rouge indique
une réaction positive.
TDA : Ajouter le réactif TDA, une couleur marron foncé indique une réaction positive.
IND : Ajouter le réactif de Kovacs puis attendre 2 min, un anneau rouge apparait indique une
réaction positive.
La lecture de la galerie doit se faire en se référant au tableau de lecture (annexe 01 ), Les tests
sont regroupés en groupe de 3 et une valeur de 1, 2 ou 4 est indiquée pour chacun. Additionner à
l’intérieur de chaque groupe les nombres correspondants aux tests positifs. On obtient un nombre
de 7 chiffres qui sert de code d’identification (Guiraud, 2003).
Le code numérique obtenu permet d’identifier la souche étudié en se référant au logiciel
d’identification identification.xls.
II.6.3. Identification des cocci à GRAM positif
Les cocci à Gram positif comprennent Staphylococcus (catalase-positif), qui développe des
grappes, et Streptococcus (catalase-négatif), qui se développe en chaînes. Les staphylocoques se
Matériel et méthodes
32
La lecture de ces réactions se fait à l'aide du Tableau de lecture.
➢ Préparation de la galerie
• Réunir fond et couvercle d'une boîte d'incubation et répartir environ 5 ml d'eau distillée ou
déminéralisée dans les alvéoles pour créer une atmosphère humide.
• Inscrire la référence de la souche sur la languette latérale de la boîte.
• Placer la galerie dans la boîte d'incubation.
➢ Préparation de l’inoculum
• Faire une suspension bactérienne dans un tube d’eau distillée stérile, d’opacité légère avec
une seule colonie pure prélevée sur un milieu gélosé.
➢ Inoculation de la galerie
• Remplir les tubes et les cupules des tests : CIT, VP, GEL avec la suspension bactérienne.
• Créer une anaérobiose dans les tests : ADH, LDC, ODC, URE, H2S en remplissant leur
cupule d’huile de paraffine.
• Remplir uniquement les tubes des autres tests.
• Refermer la boite d’incubation et la placer à 37 °C pendant 18 à 24 heures.
➢ Lecture
Les réactions produites pendant la période d’incubation se traduisent par des virages colorés,
sauf certaines sont révélées par l’addition de Réactifs :
VP : Ajouter les réactifs (VP I + VP II) puis attendre 10 min, une couleur rose rouge indique
une réaction positive.
TDA : Ajouter le réactif TDA, une couleur marron foncé indique une réaction positive.
IND : Ajouter le réactif de Kovacs puis attendre 2 min, un anneau rouge apparait indique une
réaction positive.
La lecture de la galerie doit se faire en se référant au tableau de lecture (annexe 01 ), Les tests
sont regroupés en groupe de 3 et une valeur de 1, 2 ou 4 est indiquée pour chacun. Additionner à
l’intérieur de chaque groupe les nombres correspondants aux tests positifs. On obtient un nombre
de 7 chiffres qui sert de code d’identification (Guiraud, 2003).
Le code numérique obtenu permet d’identifier la souche étudié en se référant au logiciel
d’identification identification.xls.
II.6.3. Identification des cocci à GRAM positif
Les cocci à Gram positif comprennent Staphylococcus (catalase-positif), qui développe des
grappes, et Streptococcus (catalase-négatif), qui se développe en chaînes. Les staphylocoques se