Chapitre II
Matériel et méthodes
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II.3 Analyse microbiologique :
L’analyse bactériologique des échantillons prélevés a été réalisée par la méthode
d’ensemencement en surface. C’est une technique de dénombrement qui consiste à couler une
gélose en boite de Pétri pré-fournie ou choisi selon la bactérie que l’on étudie.
II.3.1. Préparation des dilutions
Conformément aux normes AFNOR NF VO8-010 et ISO 6887-1, on utilise l’eau distillée pour
préparer des dilutions décimales d’eau à analyser.
On met à partir de la solution mère 1ml dans un tube contenant 9ml d’eau distillée stérile, ce tube
représente la dilution 10
-1 , à partir de ce dernier on met 1ml dans un nouveau tube contenant
aussi 9ml d’eau distillée, ce tube représente la dilution 10
-2
et ainsi de suite jusqu’à l’obtention
de toutes les dilutions voulues (Delarras et al., 2010).
II.3.2. Dénombrement de la flore totale bactérienne et les coliformes totaux
A partir de chaque échantillon d’eau brute ou leurs dilution décimale préparée (10
-1 ; 10
-2 ;10
-3 ) ;
à l’aide d’une pipette Pasteur on a porté aseptiquement 0.1ml et on l’étale, à l’aide d’une pipette
râteau, à la surface d’une gélose de Tergitol pour les coliformes totaux et de Mueller Hinton pour
la flore totale (figure II.7).
Les boites sont incubées couvercle en bas à 37°C pendant 24h à 48h . Après l’incubation les
colonies sont dénombrées.
Figure II.7 :dénombrement après culture bactérienne.
0.1ml
0.1ml
0.1m
l