16
-
BIOGHIMIE GÉNÉRALE
_
.
'
enceinte saturée des vapeurs des deux solvants. En B, on a préalablement
déposé une microgoutte dela solution à analyser.“ Le solvant, par capillarité,
migre le long du papier. Avant qu’il n’atteigne l’extrémité, le papier est retiré,
séché et un réactif convenable est pulvérisé an de révéler une ou plusieurs
taches dont la position par rapport au front du liquide (F) (RF = 1 pour le
front du. liquide; < 1 pour les composés analysés) est caractéristique. Elle est
encore plus spécique si la chromatographie est effectuée à nouveau selon une
_
deuxième dimension perpendiculaire à la précédente dans un deuxième solvant.
Les acides aminés d’un même groupe (neutres, alcools, acides basiques) se
répartissent sur une même courbe.
-
b) La chromatographie sur couche mince de cellulose, d’alumine, etc., s’est
développée récemment.
’
c) La chromatographie sur colonne (g. 3) (Tswett, Lederer, Moore (l) et
Stein (1) permet d’adsorber des mélanges qu’un solvant convenable élue. Une
colonne de dextranes permet de ralentir le trajet des plus petites molécules,
alors que les grosses ne sont pas retenues par les mailles de ce « tamis molé—
culaire ». Certains dextranes polymérisés forment ofce de tamis ralentissant sur
colonne la migration des molécules selon la taille de celles—ci. Il existe une
relation linéaire entre le logarithme de la masse moléculaire et le volume
d’élution.
“
.
_
Cette
à travers ge] utilise un gel de polydextrane ou
Sephadex plus ou moins polymérisé où les molécules linéaires sont réticulées
entre elles et forment des perles qui ont la propriété de goner lorsqu’elles sont
mises en contact avec de l’eau ou une solution de sels. Le gel agit alors comme
un tamis. Les molécules qui sont d’une taille supérieure à celle des
perles circulent librement entre les mailles du gel et ne sont pas
retenues, alors que les molécules plus petites entrent dans les perles
_
-et_sont plus.ou moins œtenuesén fonction de leur taille. Il suft
_
ensuite de faire passer ‘un solvant déterminé. sur la colOnne_ de gel
pour obtenir_uné séparation des différentes molécules d’un mélange
'
en fonCtionde leur taille, Le type_de gel,—donc le degré de réticulation,
.
détermine. la zone de poids moléculaire pour laquelle il sera efcace.
_
_
.
.
II“-permet de scinder le mélange en_ ses différents- constituants,
re’cueillis séparément à l’aide" d’un collecteur de fractions automatique, dans des tubes à essai successifs automatiquement déplacés,
1
selon une réaction semi—logarithmique. .
2
P. M.
100 000
Y—gldbuline
'
é
_
Sérumalbumîne
FIG. 3.
.
Myoglobîne
'
'
_
'
-
'
'
'
Gytochrome
'
10000
lnsuline
colonne.
,
_
‘
,.
'
1, composé
"
’
_
’
en cours
de
,
'
'
f
_
'
Séparaü°n;
.
'
‘
Volume d‘élutiob
‘
'
2, colonne;
_
,
_
.
.
*
_
'
3: ltre;
FIG. 4.
P.M. en fonction du volume d’élution d’une chroma—
__
4, éluat.
tographie sur Séphadex (coordonnées semi-logarithmiques).
(1) Prix Nobel.
_
'
,
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—
,
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BIOGHIMIE GÉNÉRALE
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enceinte saturée des vapeurs des deux solvants. En B, on a préalablement
déposé une microgoutte dela solution à analyser.“ Le solvant, par capillarité,
migre le long du papier. Avant qu’il n’atteigne l’extrémité, le papier est retiré,
séché et un réactif convenable est pulvérisé an de révéler une ou plusieurs
taches dont la position par rapport au front du liquide (F) (RF = 1 pour le
front du. liquide; < 1 pour les composés analysés) est caractéristique. Elle est
encore plus spécique si la chromatographie est effectuée à nouveau selon une
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deuxième dimension perpendiculaire à la précédente dans un deuxième solvant.
Les acides aminés d’un même groupe (neutres, alcools, acides basiques) se
répartissent sur une même courbe.
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b) La chromatographie sur couche mince de cellulose, d’alumine, etc., s’est
développée récemment.
’
c) La chromatographie sur colonne (g. 3) (Tswett, Lederer, Moore (l) et
Stein (1) permet d’adsorber des mélanges qu’un solvant convenable élue. Une
colonne de dextranes permet de ralentir le trajet des plus petites molécules,
alors que les grosses ne sont pas retenues par les mailles de ce « tamis molé—
culaire ». Certains dextranes polymérisés forment ofce de tamis ralentissant sur
colonne la migration des molécules selon la taille de celles—ci. Il existe une
relation linéaire entre le logarithme de la masse moléculaire et le volume
d’élution.
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Cette
à travers ge] utilise un gel de polydextrane ou
Sephadex plus ou moins polymérisé où les molécules linéaires sont réticulées
entre elles et forment des perles qui ont la propriété de goner lorsqu’elles sont
mises en contact avec de l’eau ou une solution de sels. Le gel agit alors comme
un tamis. Les molécules qui sont d’une taille supérieure à celle des
perles circulent librement entre les mailles du gel et ne sont pas
retenues, alors que les molécules plus petites entrent dans les perles
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-et_sont plus.ou moins œtenuesén fonction de leur taille. Il suft
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ensuite de faire passer ‘un solvant déterminé. sur la colOnne_ de gel
pour obtenir_uné séparation des différentes molécules d’un mélange
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en fonCtionde leur taille, Le type_de gel,—donc le degré de réticulation,
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détermine. la zone de poids moléculaire pour laquelle il sera efcace.
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II“-permet de scinder le mélange en_ ses différents- constituants,
re’cueillis séparément à l’aide" d’un collecteur de fractions automatique, dans des tubes à essai successifs automatiquement déplacés,
1
selon une réaction semi—logarithmique. .
2
P. M.
100 000
Y—gldbuline
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Sérumalbumîne
FIG. 3.
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Myoglobîne
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Gytochrome
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lnsuline
colonne.
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Volume d‘élutiob
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2, colonne;
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3: ltre;
FIG. 4.
P.M. en fonction du volume d’élution d’une chroma—
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4, éluat.
tographie sur Séphadex (coordonnées semi-logarithmiques).
(1) Prix Nobel.
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