ENZYMES
.
159
On exprime l’activité enzymatique ainsi mesurée en «unités », dontla déniti‘0n esttrès variable. L’unité d’activité enzymatique la meilleure est celle
qui exprime (en mM ou en uM) la quantité de substrat métabolisé ou de pro=
'
duits formés, par minute et par mg 'ou par ml;màis il existe de nombreuses
autres unités consacrées par l’usage.
.
-
…
_
L’interprétation du dosage d’une enzyme tissulaire doit tenir compte d’un
certain nombre de facteurs. La diminution d’activité enzymatique peut être
due à une diminution de concentration ou un changement de spécicité par
modication de structure primaire de l’enzyme, mais auSSi une diminution
de concentration d’activateur ou de coenzymes, ou au contraire dél’augmentation du taux d’inhibiteurs, ou aussi à une diminution de l’extractibité de
-
l’enzyme, ou d’une diiculté de réaction enzyme—substrat par suite de barrières
aux structures.
_
.
…
'
Préparation et isolement des enzymes
'
_
-
'
:
'
.
.
Les premières et les mieux connues des enzymes ont été les enzymes Solubles
ou facilement mises en solution (lyoenzymes) par opposition aux enzymes liées
aux structures cellulaires (desmoenzymes). Les progrès techniques ont permis
d’isoler d’abord certaines de ces: enzymes avec les fractions .subceulaires
auxquelles elles appartenaient (par exemple la succinodéhydrase et les mitochondries par ultracentrifugation fractionnée); ensuite l’emploi de congélation
et de décOngélation successives, de substances tensio—actives (sels biaires) a
-
permisl’obtention à l’état dissous, libre destructure, de la succinodéhydrase.
_
Critères de pureté
—
_
Ce sont les mêmes que ceux de toutes les protéines ; on peut y aj0uter la
mesure de l’activité enzymatique qui augmente par purications_ successives,
puis atteint un maximum, que des nouvelles purications nepermettent pas
de dépasser. On rapporte l’unité d’activité —à la quantité de protéine sèche.
L’activité d’une enzyme pure est exprimée par l’activité spécique, turn over
'
number ou nombre de rotation qui est le nombre de molécules de substrat
transformées par molécule d’enZyme en une minute: celui—ci varie entre
100, dans le cas d’une enzyme très peu active, et 10 000 000 pour une enzyme
très active.
.
_
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_
_
_
ISOENZYMES
'
OU ISOZYMES OU FORNŒS
'
‘
MULTIPLES DES ENZYMES
-
…
.
quelques années a—'été établi =un‘aütfe mécanisme de régulation où
ihtei‘Vient la structure moléculaire des enzymes :“leSisozÿmæÏ Certaines enzymes ‘
.
existent
formes moléculaires multiples “dans” un.tissu et une espèce‘donnée.
.,
'
PIG. 72.’— Quantités relatives
M4 M3H
de la Iactase «dé$hydr0gégiœ”dans…différentsi
.
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_
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…
“tissus : résultats«obtenus—Japanéleetrdphorèæf 7Ï—Fôi”é
‘
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sur gel.
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__
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…
Lesextrassont déposés surlahgned0ngme ……
—*‘*r
‘* ’+
'Quatrelzoenzymes m1grentverslanodeetla
82e9‘“
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“La;_ç‘!ÏnÏÊ1}S-‘IQP _1et, ‘_‘lë}jg
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chaque tache
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L’activité d’une enzyme pure est exprimée par l’activité spécique, turn over
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number ou nombre de rotation qui est le nombre de molécules de substrat
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