5.2 Analyses globalisées du génome et de son expression
123
© Dunod – La photocopie non autorisée est un délit.
a) Transcriptomique (les « microarrays »
ou micro-alignements)
Le premier niveau d’expression est celui des ARN messagers, appelés
également transcrits, d’où le nom de transcriptomique donné à cette
approche. Il y a environ 2-3 fois plus d’ARN messagers que de gènes.
Les puces à ADN contiennent des échantillons d’ADN correspondants
à des gènes dûment identifiés et déposés sur un support par robotique
(fig. 49). On utilise plus couramment pour les alignements à haute
densité des oligonucléotides, chaque gène étant représenté par 10-20 oligonucléotides spécifiques synthétiques. L’ensemble des ADNc est
déposé sur ces plaques. Ces ADNc sont des copies des ARNm d’intérêt
provenant d’un tissu donné et obtenu par transcription réverse. Ces
ADNc ont été préalablement marqués au moyen de sondes fluorescentes. Des liaisons homologues s’établissent entre la sonde et ceux des
ADNc marqués correspondants. La liaison établie produit un signal
fluorescent au Laser. Ce signal est normalisé, il est, dans certaines conditions, est quantitatif, c’est-à-dire qu’il correspond à la quantité du gène
ou de la séquence d’intérêt présente dans le mélange étudié. La
figure 49 est un exemple, chaque tache représente un gène, son intensité est proportionnelle à la quantité du transcrit présent. Il faut bien
Figure 49 Micro-alignements (« microarrays »).
L’intensité des taches est proportionnelle à la quantité d’ARN
messager (document dû à l’obligeance de J.-J. Léger).
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© Dunod – La photocopie non autorisée est un délit.
a) Transcriptomique (les « microarrays »
ou micro-alignements)
Le premier niveau d’expression est celui des ARN messagers, appelés
également transcrits, d’où le nom de transcriptomique donné à cette
approche. Il y a environ 2-3 fois plus d’ARN messagers que de gènes.
Les puces à ADN contiennent des échantillons d’ADN correspondants
à des gènes dûment identifiés et déposés sur un support par robotique
(fig. 49). On utilise plus couramment pour les alignements à haute
densité des oligonucléotides, chaque gène étant représenté par 10-20 oligonucléotides spécifiques synthétiques. L’ensemble des ADNc est
déposé sur ces plaques. Ces ADNc sont des copies des ARNm d’intérêt
provenant d’un tissu donné et obtenu par transcription réverse. Ces
ADNc ont été préalablement marqués au moyen de sondes fluorescentes. Des liaisons homologues s’établissent entre la sonde et ceux des
ADNc marqués correspondants. La liaison établie produit un signal
fluorescent au Laser. Ce signal est normalisé, il est, dans certaines conditions, est quantitatif, c’est-à-dire qu’il correspond à la quantité du gène
ou de la séquence d’intérêt présente dans le mélange étudié. La
figure 49 est un exemple, chaque tache représente un gène, son intensité est proportionnelle à la quantité du transcrit présent. Il faut bien
Figure 49 Micro-alignements (« microarrays »).
L’intensité des taches est proportionnelle à la quantité d’ARN
messager (document dû à l’obligeance de J.-J. Léger).