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5 • Techniques et biotechnologies
présents parmi des milliers d’autres en confectionnant des hybrides spécifiques et quantifiables. Le concept de sonde repose sur le principe selon
lequel une séquence de nucléotides donnée s’apparie spécifiquement à
la séquence complémentaire. Cet appariement se fait au moyen de liaisons
hydrogène qui peuvent être rompues par des moyens physiques.
Les sondes (ou « probes ») ADN sont de trois types (fig. 38) :
– Les sondes génomiques qui sont soit la copie d’un gène et peuvent
comprendre des séquences introniques ou des portions de la partie
régulatrice du gène, soit des copies de portions anonymes non
codantes du génome qui sont utilisées pour les études de polymorphisme. Rappelons que dans un organisme donné l’ADN génomique est le même dans tous les noyaux et dans tous les tissus ayant
le même équipement diploïde ou haploïde, quel que soit le tissu.
– Les sondes ADNc, c pour complémentaire qui sont des copies monobrins des ARN messagers d’un tissu donné. On les obtient par transcription réverse. Ces sondes sont spécifiques d’un tissu donné (myocarde,
foie, mais aussi myocarde adulte ou embryonnaire, foie normal ou
cancéreux etc.). Il n’y a généralement pas de sondes ARN, car cette
molécule est trop fragile, plus que l’ADN. Par ailleurs ces sondes ne
représentent que les exons du gène, et pas ses introns.
– Les oligonucléotides sont des sondes de petite dimension et ne représentent qu’une portion du gène ou de la partie anonyme du génome,
elles sont fabriquées artificiellement par synthèse et disponibles dans
le commerce. Ce sont des petites séquences d’une vingtaine de nucléotides qui servent souvent d’amorces par exemple au cours de la PCR
par exemple. On peut confectionner de cette manière des séquences
à la demande, complémentaires de n’importe quelle portion de gène.
Un insert est une sonde recombinée à l’ADN d’un plasmide, et donc
insérée dans ce plasmide.
Les sondes pour être utilisées doivent être marquées au moyen de
marqueurs radioactifs ou fluorescents.
Les hybrides formés entre la séquence d’intérêt et la sonde sont
obtenus en faisant appel au principe de l’appariement des bases homo-
5 • Techniques et biotechnologies
présents parmi des milliers d’autres en confectionnant des hybrides spécifiques et quantifiables. Le concept de sonde repose sur le principe selon
lequel une séquence de nucléotides donnée s’apparie spécifiquement à
la séquence complémentaire. Cet appariement se fait au moyen de liaisons
hydrogène qui peuvent être rompues par des moyens physiques.
Les sondes (ou « probes ») ADN sont de trois types (fig. 38) :
– Les sondes génomiques qui sont soit la copie d’un gène et peuvent
comprendre des séquences introniques ou des portions de la partie
régulatrice du gène, soit des copies de portions anonymes non
codantes du génome qui sont utilisées pour les études de polymorphisme. Rappelons que dans un organisme donné l’ADN génomique est le même dans tous les noyaux et dans tous les tissus ayant
le même équipement diploïde ou haploïde, quel que soit le tissu.
– Les sondes ADNc, c pour complémentaire qui sont des copies monobrins des ARN messagers d’un tissu donné. On les obtient par transcription réverse. Ces sondes sont spécifiques d’un tissu donné (myocarde,
foie, mais aussi myocarde adulte ou embryonnaire, foie normal ou
cancéreux etc.). Il n’y a généralement pas de sondes ARN, car cette
molécule est trop fragile, plus que l’ADN. Par ailleurs ces sondes ne
représentent que les exons du gène, et pas ses introns.
– Les oligonucléotides sont des sondes de petite dimension et ne représentent qu’une portion du gène ou de la partie anonyme du génome,
elles sont fabriquées artificiellement par synthèse et disponibles dans
le commerce. Ce sont des petites séquences d’une vingtaine de nucléotides qui servent souvent d’amorces par exemple au cours de la PCR
par exemple. On peut confectionner de cette manière des séquences
à la demande, complémentaires de n’importe quelle portion de gène.
Un insert est une sonde recombinée à l’ADN d’un plasmide, et donc
insérée dans ce plasmide.
Les sondes pour être utilisées doivent être marquées au moyen de
marqueurs radioactifs ou fluorescents.
Les hybrides formés entre la séquence d’intérêt et la sonde sont
obtenus en faisant appel au principe de l’appariement des bases homo-