Fiche 14 • Spectrophotométrie
32
de l’hémoglobine oxygénée humaine (HbO 2 ), obtenu par balayage continu des longueurs
d’onde de 220 à 650 nm.
276
344
415
541
577
Longueur d’onde en nm
Absorbance
0
0,1
0,2
0,3
0,4
0,5
0,6
0,7
0,8
0,9
1
1,1
220 240 260 280 300 320 340 360 380 400 420 440 460 480 500 520 540 560 580 600 620 640
L’hémoglobine oxygénée contient quatre molécules de dioxygène fixées individuellement
à chacun des quatre noyaux hème (Fiche 31). Le spectre de l’hémoglobine est dominé par
l’absorption de la lumière par ces quatre noyaux. On trouve en premier lieu une bande
d’absorption à la limite de l’UV et du visible, dite bande Soret (maximum à 415 nm) ;
outre un second maximum dans l’UV à 344 nm, on observe deux autres bandes dans le
domaine du visible (maxima à 541 et 577 nm) : ces deux bandes d’absorption sont responsables de la couleur rouge vif de l’hémoglobine oxygénée (et donc du sang artériel). Dans
l’ultra-violet, l’absorption autour de 276 nm est redevable des chaînes latérales d’aminoacides aromatiques, principalement les 6 tryptophanes et les 12 tyrosines (Fiche 34). En
deçà de 240 nm, on enregistre l’absorption par d’autres chaînes latérales d’aminoacides
mais surtout par les liaisons peptidiques (au nombre de 570). Toutes ces bandes d’absorption correspondent à des systèmes de liaisons p délocalisées (Fiche 7).
5. DEUX LIGNES DE CALCUL
Ce spectre de l’hémoglobine oxygénée a été obtenu à partir d’une solution d’hémoglobine
diluée à 0,12 g L –1 , introduite dans une cuvette de 1 cm d’épaisseur interne. Calculons
le coefficient d’absorption spécifique de l’hémoglobine à 415 nm, longueur d’onde où
l’absorbance est égale à 0,98 :
ε S
S
A
c
,
,
,
,
415
415
1
1
0 98
0 12 1
8 17
=
=
×
=
⋅
⋅
−
−
l
L g
cm
9782100724185-Livre.indb 32
20/05/15 19:11
32
de l’hémoglobine oxygénée humaine (HbO 2 ), obtenu par balayage continu des longueurs
d’onde de 220 à 650 nm.
276
344
415
541
577
Longueur d’onde en nm
Absorbance
0
0,1
0,2
0,3
0,4
0,5
0,6
0,7
0,8
0,9
1
1,1
220 240 260 280 300 320 340 360 380 400 420 440 460 480 500 520 540 560 580 600 620 640
L’hémoglobine oxygénée contient quatre molécules de dioxygène fixées individuellement
à chacun des quatre noyaux hème (Fiche 31). Le spectre de l’hémoglobine est dominé par
l’absorption de la lumière par ces quatre noyaux. On trouve en premier lieu une bande
d’absorption à la limite de l’UV et du visible, dite bande Soret (maximum à 415 nm) ;
outre un second maximum dans l’UV à 344 nm, on observe deux autres bandes dans le
domaine du visible (maxima à 541 et 577 nm) : ces deux bandes d’absorption sont responsables de la couleur rouge vif de l’hémoglobine oxygénée (et donc du sang artériel). Dans
l’ultra-violet, l’absorption autour de 276 nm est redevable des chaînes latérales d’aminoacides aromatiques, principalement les 6 tryptophanes et les 12 tyrosines (Fiche 34). En
deçà de 240 nm, on enregistre l’absorption par d’autres chaînes latérales d’aminoacides
mais surtout par les liaisons peptidiques (au nombre de 570). Toutes ces bandes d’absorption correspondent à des systèmes de liaisons p délocalisées (Fiche 7).
5. DEUX LIGNES DE CALCUL
Ce spectre de l’hémoglobine oxygénée a été obtenu à partir d’une solution d’hémoglobine
diluée à 0,12 g L –1 , introduite dans une cuvette de 1 cm d’épaisseur interne. Calculons
le coefficient d’absorption spécifique de l’hémoglobine à 415 nm, longueur d’onde où
l’absorbance est égale à 0,98 :
ε S
S
A
c
,
,
,
,
415
415
1
1
0 98
0 12 1
8 17
=
=
×
=
⋅
⋅
−
−
l
L g
cm
9782100724185-Livre.indb 32
20/05/15 19:11