9. S YNTHÈ SE ET ROUTAGE DES PROTÉINES CHEZ LES EUCARYOTES. BIOGENÈ SE DES ORGANITES 251
© Dunod – La photocopie non autorisée est un délit.
quantitative des clichés autoradiographiques, basée
sur le comptage des grains d’argent par unité de
surface, conduit à décrire la voie suivante : réticulum endoplasmique rugueux, appareil de Golgi,
grains de zymogène et enfin lumière de la
glande (voir figure 9.4). Cette voie est constante
chez tous les Eucaryotes, de même que sa cinétique, qui s’échelonne sur deux heures environ
entre le début et la fin du processus. Il existe
cependant des exceptions, par rapport à ce dernier
point : on connaît le cas des granules corticaux de
certains ovocytes animaux, ou celui de l’acrosome
des spermatozoïdes, qui sont des granules de
sécrétion dont la décharge peut être très retardée
(jusqu’au moment de la fécondation).
Ce résultat est en soi très important, mais la
méthode ne fournit aucune indication sur les
mécanismes moléculaires mis en jeu ; une autre
approche doit être développée, donnant la possibilité de décomposer le système en éléments simples
et permettant une analyse in vitro. Des expériences
conduites sur le principe précédemment décrit ont
donc été appliquées à des fractions cellulaires
purifiées, identifiables aux structures impliquées
dans la voie présentée plus haut.
2.2.3. A PPORTD UF RACTIONNEMENT CELLULAIRE
Lorsqu’une cellule est homogénéisée, l’organisation du réseau complexe de cavités constitué par
le RR ou le RL est totalement détruite, de même
que celle qui préside à la structure de l’appareil de
Analyse cellulaire du processus sécrétoire
Ce processus a été analysé par une expérience
de type pulse-chase, de la façon suivante :
–de fines tranches de tissu pancréatique frais
sont mises en survie dans un milieu de culture permettant aux cellules de vivre et de
fonctionner pendant quelques heures ;
–de la leucine tritiée (radioactive) est ajoutée au
milieu ; celle-ci étant un précurseur des protéines, elle s’y incorpore au cours de l’expérience ;
–une incubation courte (moins de 5m inutes)
est suivie d’un rinçage soigneux des cellules,
pour éliminer toute radioactivité soluble, et de
leur remise dansun milieu normal ;
–des échantillons de tissus sont ensuite prélevés régulièrement (toutes les 20 minutes environ) pendant deux heures, puis fixés et traités
pour la microscopie électronique ;
–les coupes obtenues sont traitées pour l’autoradiographie à haute résolution, les grains
d’argent observés révélant la présence de protéines radioactives au sein des ultrastructures.
E NCARTT ECHNIQUE
Figure 9.4
Expériences historiques sur la sécrétion des protéines par les cellules pancréatiques
Le phénomène sécrétoire est étudié au moyen d’expériences d’incorporation de leucine tritiée (de type pulse-chase),
suivies d’autoradiographie. La radioactivité se déplace, au cours du temps, successivement dans les compartiments
mis en jeu dans ce processus : réticulum endoplasmique rugueux (rg) ; appareil de Golgi (d) ; vésicules de concentration (vc) et grains de zymogène (gz) ; m:mitochondries ; n:noyau. (D’après J. Jamieson).
rg
n
© Dunod – La photocopie non autorisée est un délit.
quantitative des clichés autoradiographiques, basée
sur le comptage des grains d’argent par unité de
surface, conduit à décrire la voie suivante : réticulum endoplasmique rugueux, appareil de Golgi,
grains de zymogène et enfin lumière de la
glande (voir figure 9.4). Cette voie est constante
chez tous les Eucaryotes, de même que sa cinétique, qui s’échelonne sur deux heures environ
entre le début et la fin du processus. Il existe
cependant des exceptions, par rapport à ce dernier
point : on connaît le cas des granules corticaux de
certains ovocytes animaux, ou celui de l’acrosome
des spermatozoïdes, qui sont des granules de
sécrétion dont la décharge peut être très retardée
(jusqu’au moment de la fécondation).
Ce résultat est en soi très important, mais la
méthode ne fournit aucune indication sur les
mécanismes moléculaires mis en jeu ; une autre
approche doit être développée, donnant la possibilité de décomposer le système en éléments simples
et permettant une analyse in vitro. Des expériences
conduites sur le principe précédemment décrit ont
donc été appliquées à des fractions cellulaires
purifiées, identifiables aux structures impliquées
dans la voie présentée plus haut.
2.2.3. A PPORTD UF RACTIONNEMENT CELLULAIRE
Lorsqu’une cellule est homogénéisée, l’organisation du réseau complexe de cavités constitué par
le RR ou le RL est totalement détruite, de même
que celle qui préside à la structure de l’appareil de
Analyse cellulaire du processus sécrétoire
Ce processus a été analysé par une expérience
de type pulse-chase, de la façon suivante :
–de fines tranches de tissu pancréatique frais
sont mises en survie dans un milieu de culture permettant aux cellules de vivre et de
fonctionner pendant quelques heures ;
–de la leucine tritiée (radioactive) est ajoutée au
milieu ; celle-ci étant un précurseur des protéines, elle s’y incorpore au cours de l’expérience ;
–une incubation courte (moins de 5m inutes)
est suivie d’un rinçage soigneux des cellules,
pour éliminer toute radioactivité soluble, et de
leur remise dansun milieu normal ;
–des échantillons de tissus sont ensuite prélevés régulièrement (toutes les 20 minutes environ) pendant deux heures, puis fixés et traités
pour la microscopie électronique ;
–les coupes obtenues sont traitées pour l’autoradiographie à haute résolution, les grains
d’argent observés révélant la présence de protéines radioactives au sein des ultrastructures.
E NCARTT ECHNIQUE
Figure 9.4
Expériences historiques sur la sécrétion des protéines par les cellules pancréatiques
Le phénomène sécrétoire est étudié au moyen d’expériences d’incorporation de leucine tritiée (de type pulse-chase),
suivies d’autoradiographie. La radioactivité se déplace, au cours du temps, successivement dans les compartiments
mis en jeu dans ce processus : réticulum endoplasmique rugueux (rg) ; appareil de Golgi (d) ; vésicules de concentration (vc) et grains de zymogène (gz) ; m:mitochondries ; n:noyau. (D’après J. Jamieson).
rg
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