124 B IOLOGIE CELLULAIRE
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Figure 5.14
Protocole d’obtention de vésicules normales ou retournées, à partir de fantômes d’hématies de Mammifères
La simple manipulation du milieu d’incubation des cellules, en particulier la présence des ions Mg
2+
, conduit à une
vésiculisation contrôlée, dans un sens ou dans l’autre. Après homogénéisation des cellules, les petites vésicules obtenues sont récupérées par centrifugation.
(D’après A. Berkaloff et al., Biologie et Physiologie cellulaires, Hermann).
Pour localiser les protéines membranaires, on
peut aussi utiliser des anticorps marqués obtenus
contre ces protéines purifiées (anticorps polyclonaux) ou non (anticorps monoclonaux). Ces anticorps sont aussi bien employés pour des
visualisations in situ que pour des études biochimiques, après électrophorèse, par exemple. La distinction entre protéines extrinsèques et
intrinsèques, parmi toutes celles repérées grâce à
la technique précédente, se fait sur la base de la
solubilisation des premières après des traitements
doux des cellules ou des vésicules (variation de la
force ionique ou du pH du milieu) et des lavages
qui permettent de les éliminer (par centrifugation).
Un bon critère qui différencie les protéines ou
leurs domaines situés dans le territoire extracellulaire (pour celles appartenant à la membrane plasmique), et en général celles tournées du côté nonhyaloplasmique de la plupart des membranes cellulaires, est constitué par la présence de motifs
glucidiques. Ceux-ci peuvent être détectés grâce à
des gels d’électrophorèse des protéines entières ou
de peptides issus de digestions ménagées, par des
colorations appropriées de type cytochimique.
Une approche indirecte, liée au développement
récent des techniques du génie génétique et à la
multiplication des séquences de protéines qui
n’ont été ni isolées ni purifiées, permet de tenter
de localiser les domaines hydrophobes le long des
chaînes polypeptidiques. On sait que les chaînes
latérales des acides aminés sont plus ou moins
hydrophobes (voir chapitre 1) et il est possible de
quantifier ce degré d’hydrophobicité à partir
d’études biophysiques directes ou bien, par analogie, à partir d’études statistiques concernant des
protéines connues (solubles ou membranaires)
dont la structure tridimensionnelle a été établie.
On rappelle à ce sujet que les protéines hydrosolubles enfouissent leurs segments hydrophobes au
cœur de la molécule. Une échelle d’hydrophobicité
pompe
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vésiculisation contrôlée, dans un sens ou dans l’autre. Après homogénéisation des cellules, les petites vésicules obtenues sont récupérées par centrifugation.
(D’après A. Berkaloff et al., Biologie et Physiologie cellulaires, Hermann).
Pour localiser les protéines membranaires, on
peut aussi utiliser des anticorps marqués obtenus
contre ces protéines purifiées (anticorps polyclonaux) ou non (anticorps monoclonaux). Ces anticorps sont aussi bien employés pour des
visualisations in situ que pour des études biochimiques, après électrophorèse, par exemple. La distinction entre protéines extrinsèques et
intrinsèques, parmi toutes celles repérées grâce à
la technique précédente, se fait sur la base de la
solubilisation des premières après des traitements
doux des cellules ou des vésicules (variation de la
force ionique ou du pH du milieu) et des lavages
qui permettent de les éliminer (par centrifugation).
Un bon critère qui différencie les protéines ou
leurs domaines situés dans le territoire extracellulaire (pour celles appartenant à la membrane plasmique), et en général celles tournées du côté nonhyaloplasmique de la plupart des membranes cellulaires, est constitué par la présence de motifs
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des gels d’électrophorèse des protéines entières ou
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colorations appropriées de type cytochimique.
Une approche indirecte, liée au développement
récent des techniques du génie génétique et à la
multiplication des séquences de protéines qui
n’ont été ni isolées ni purifiées, permet de tenter
de localiser les domaines hydrophobes le long des
chaînes polypeptidiques. On sait que les chaînes
latérales des acides aminés sont plus ou moins
hydrophobes (voir chapitre 1) et il est possible de
quantifier ce degré d’hydrophobicité à partir
d’études biophysiques directes ou bien, par analogie, à partir d’études statistiques concernant des
protéines connues (solubles ou membranaires)
dont la structure tridimensionnelle a été établie.
On rappelle à ce sujet que les protéines hydrosolubles enfouissent leurs segments hydrophobes au
cœur de la molécule. Une échelle d’hydrophobicité
pompe
Na+/K+