2 • Chromatographie liquide haute performance
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EXERCICES
Solutions en fin d’ouvrage
Exercice 2.1
Les appareils actuels de CLHP peuvent utiliser des colonnes de 300 mm de diamètre interne
(d C dans le texte) pour lesquelles le débit optimum conseillé est de 4 mL·min
−1 .
1. Montrer par un calcul simple que ce débit conduit pratiquement à la même vitesse linéaire
de la phase mobile que pour une colonne de même type mais d’un diamètre standard de 4,6
mm pour laquelle le débit conseillé est de 1 mL·min
−1 .
2. La séparation d’un échantillon comportant 16 HPA (hydrocarbures polyaromatiques) a
été effectuée sur une colonne de type RP–18 (L C = 25 cm, d C = 300 mm). Le débit de la
phase mobile (acétonitrile/eau) est de 4 mL·min
−1 . L’un de ces HPA a un temps de rétention
de 48 min.
Calculer le volume de rétention de ce composé. Que peut-on en conclure ?
3. On dispose de deux colonnes remplies de la même phase stationnaire, l’une a un diamètre intérieur d C de 4,6 mm et l’autre, de 300 mm. Les colonnes ont mêmes longueur et
taux de remplissage (V S /V M ). On décide de les utiliser successivement avec le même chromatographe et dans conditions identiques, avec les débits conseillés ci-dessus pour chacune
d’elles. On injecte la même quantité d’un même composé dans les deux expériences.
a) Quand on passe d’une colonne à l’autre, le volume de rétention (ou d’élution) du composé
est-il modifié ?
b) Si la sensibilité du détecteur n’a pas été modifiée entre les deux expériences, l’intensité
du pic correspondant sera-t-elle différente ?
Exercice 2.2
Quel est l’ordre d’élution des acides suivants en CLHP avec une colonne dont la phase
stationnaire est de type C18 et une phase mobile un tampon formiate C = 200 mM, de
pH 9 ?
1. acide linoléique
CH 3 (CH 2 ) 4 CH = CHCH 2 CH = CH(CH 2 ) 7 CO 2 H
2. acide arachidique
CH 3 (CH 2 ) 18 CO 2 H
3. acide oléique
CH 3 (CH 2 ) 7 CH = CH(CH 2 ) 7 CO 2 H
Exercice 2.3
Indiquer en regard de chacune de ces techniques chromatographiques, le terme qui représente le mode essentiel de fixation sur la phase.
1. phase inversée
a. masse moléculaire
2. perméation de gel
b. hydrophilie
3. chromatographie ionique
c. hydrophobie
4. phase normale
d. protonation/ionisation
© Dunod – La photocopie non autorisée est un délit
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EXERCICES
Solutions en fin d’ouvrage
Exercice 2.1
Les appareils actuels de CLHP peuvent utiliser des colonnes de 300 mm de diamètre interne
(d C dans le texte) pour lesquelles le débit optimum conseillé est de 4 mL·min
−1 .
1. Montrer par un calcul simple que ce débit conduit pratiquement à la même vitesse linéaire
de la phase mobile que pour une colonne de même type mais d’un diamètre standard de 4,6
mm pour laquelle le débit conseillé est de 1 mL·min
−1 .
2. La séparation d’un échantillon comportant 16 HPA (hydrocarbures polyaromatiques) a
été effectuée sur une colonne de type RP–18 (L C = 25 cm, d C = 300 mm). Le débit de la
phase mobile (acétonitrile/eau) est de 4 mL·min
−1 . L’un de ces HPA a un temps de rétention
de 48 min.
Calculer le volume de rétention de ce composé. Que peut-on en conclure ?
3. On dispose de deux colonnes remplies de la même phase stationnaire, l’une a un diamètre intérieur d C de 4,6 mm et l’autre, de 300 mm. Les colonnes ont mêmes longueur et
taux de remplissage (V S /V M ). On décide de les utiliser successivement avec le même chromatographe et dans conditions identiques, avec les débits conseillés ci-dessus pour chacune
d’elles. On injecte la même quantité d’un même composé dans les deux expériences.
a) Quand on passe d’une colonne à l’autre, le volume de rétention (ou d’élution) du composé
est-il modifié ?
b) Si la sensibilité du détecteur n’a pas été modifiée entre les deux expériences, l’intensité
du pic correspondant sera-t-elle différente ?
Exercice 2.2
Quel est l’ordre d’élution des acides suivants en CLHP avec une colonne dont la phase
stationnaire est de type C18 et une phase mobile un tampon formiate C = 200 mM, de
pH 9 ?
1. acide linoléique
CH 3 (CH 2 ) 4 CH = CHCH 2 CH = CH(CH 2 ) 7 CO 2 H
2. acide arachidique
CH 3 (CH 2 ) 18 CO 2 H
3. acide oléique
CH 3 (CH 2 ) 7 CH = CH(CH 2 ) 7 CO 2 H
Exercice 2.3
Indiquer en regard de chacune de ces techniques chromatographiques, le terme qui représente le mode essentiel de fixation sur la phase.
1. phase inversée
a. masse moléculaire
2. perméation de gel
b. hydrophilie
3. chromatographie ionique
c. hydrophobie
4. phase normale
d. protonation/ionisation
© Dunod – La photocopie non autorisée est un délit