2 • Chromatographie liquide haute performance
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La présence, dans les solvants, des gaz ambiants (N 2 , O 2 , CO 2 ...), dissous en quantité non
négligeable, peut perturber les séparations par modification de la compressibilité des éluants
et formation éventuelle de bulles. En outre le dioxygène abrège la vie des colonnes et est
gênant pour les détecteurs électrochimiques ou photométriques UV. Il est donc préférable de
dégazer les solvants, soit avec des ultrasons soit par barbotage d’hélium, soit par diffusion
en les faisant passer dans un long tube de petit diamètre en polymère perméable aux gaz.
Pour parfaire la régulation du débit, on intercale entre la (ou les) pompe(s) et l’injecteur un amortisseur de pulsations fonctionnant suivant le principe mécanique du ballastage.
Le montage le plus simple consiste à intercaler dans le circuit de la phase liquide un tube
de faible section de plusieurs mètres de long, enroulé sur lui-même. Sous l’effet de l’onde
de pression de solvant envoyée par la pompe, le tube se déplie légèrement ce qui augmente
son volume interne et par là, contrecarre la variation de pression.
Pour obtenir les micro-débits (1 mL/min, par exemple) nécessaires aux colonnes capillaires remplies, on utilise les mêmes pompes en ajoutant à la sortie un by-pass pour diviser
le débit en deux fractions dont seule la plus petite est dirigée vers la colonne.
Par ailleurs pour résister aux pH acides de beaucoup de mélanges d’élution, qui sont
d’autant plus corrosifs que la pression est plus grande, les pièces et revêtements au contact
de la phase mobile doivent être inertes. Ainsi les pistons ou clapets des pompes sont en téflon
ou alliages spéciaux et souvent même en pierres précieuses, saphir ou agate.
Suivant leur conception, les chromatographes comportent une ou plusieurs pompes.
Associées à une chambre de mélange située en amont ou en aval, elles permettent de délivrer un éluant de composition fixe (mode isocratique) ou au contraire de composition
variable pour faire un gradient d’élution. Le système doit tenir compte dans ce second cas
des différences de compressibilité des solvants, afin que la composition soit respectée à la
pression d’utilisation.
2.3.2 Gradients basse-pression ou haute-pression
Solvant B
Solvant D
pompe 1
vers injecteur
et colonne
pompe 2
Solvant C
mélangeur
amortisseur
Solvant A
Figure 2.3 Exemple de configuration pour gradient haute pression.
Les pompes sont appelées binaires, ternaires, quaternaires suivant le nombre de solvants qu’elles peuvent mélanger (ici binaires).
© Dunod – La photocopie non autorisée est un délit
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La présence, dans les solvants, des gaz ambiants (N 2 , O 2 , CO 2 ...), dissous en quantité non
négligeable, peut perturber les séparations par modification de la compressibilité des éluants
et formation éventuelle de bulles. En outre le dioxygène abrège la vie des colonnes et est
gênant pour les détecteurs électrochimiques ou photométriques UV. Il est donc préférable de
dégazer les solvants, soit avec des ultrasons soit par barbotage d’hélium, soit par diffusion
en les faisant passer dans un long tube de petit diamètre en polymère perméable aux gaz.
Pour parfaire la régulation du débit, on intercale entre la (ou les) pompe(s) et l’injecteur un amortisseur de pulsations fonctionnant suivant le principe mécanique du ballastage.
Le montage le plus simple consiste à intercaler dans le circuit de la phase liquide un tube
de faible section de plusieurs mètres de long, enroulé sur lui-même. Sous l’effet de l’onde
de pression de solvant envoyée par la pompe, le tube se déplie légèrement ce qui augmente
son volume interne et par là, contrecarre la variation de pression.
Pour obtenir les micro-débits (1 mL/min, par exemple) nécessaires aux colonnes capillaires remplies, on utilise les mêmes pompes en ajoutant à la sortie un by-pass pour diviser
le débit en deux fractions dont seule la plus petite est dirigée vers la colonne.
Par ailleurs pour résister aux pH acides de beaucoup de mélanges d’élution, qui sont
d’autant plus corrosifs que la pression est plus grande, les pièces et revêtements au contact
de la phase mobile doivent être inertes. Ainsi les pistons ou clapets des pompes sont en téflon
ou alliages spéciaux et souvent même en pierres précieuses, saphir ou agate.
Suivant leur conception, les chromatographes comportent une ou plusieurs pompes.
Associées à une chambre de mélange située en amont ou en aval, elles permettent de délivrer un éluant de composition fixe (mode isocratique) ou au contraire de composition
variable pour faire un gradient d’élution. Le système doit tenir compte dans ce second cas
des différences de compressibilité des solvants, afin que la composition soit respectée à la
pression d’utilisation.
2.3.2 Gradients basse-pression ou haute-pression
Solvant B
Solvant D
pompe 1
vers injecteur
et colonne
pompe 2
Solvant C
mélangeur
amortisseur
Solvant A
Figure 2.3 Exemple de configuration pour gradient haute pression.
Les pompes sont appelées binaires, ternaires, quaternaires suivant le nombre de solvants qu’elles peuvent mélanger (ici binaires).
© Dunod – La photocopie non autorisée est un délit