17 • Méthodes de dosage par marquage
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17.9 AVANTAGES ET DÉFAUTS DES TESTS ELISA EN CHIMIE
Les diverses techniques ELISA donnent des résultats précis et fiables. Les résultats sont
obtenus plus rapidement que par chromatographie. Ils sont surtout destinés à éliminer tous
les échantillons négatifs qu’il n’est donc pas utile de soumettre aux étapes d’extraction puis
d’analyse chromatographique. Ils ont cependant quelques inconvénients :
1. La reconnaissance éventuelle de plusieurs molécules avec des sensibilités différentes
est une source de dispersion des résultats. Il existe donc un risque de réaction croisée
(un faux positif).
2. La gamme de mesure est étroite. Dès que la concentration augmente, on se trouve dans
une zone de moindre précision (effet de l’échelle logarithmique pour les concentrations). On doit donc trouver la bonne dilution de l’échantillon.
3. Les microplaques doivent comporter des puits contenant tous la même quantité d’anticorps, avec la même réactivité, ce qui est techniquement difficile. L’immunisation
d’un animal de laboratoire est un événement singulier, ce qui explique que les résultats puissent différer d’un kit à un autre.
4. La conservation des kits doit se faire au froid. Elle est limitée dans le temps, surtout
pour les analyses sur le terrain.
5. On doit tenir compte dans le prix de revient de ces tests, des essais en double, des standards. Ces analyses ne deviennent rentables que pour un nombre important de dosages.
17.10 FLUORO-IMMUNOLOGIE (IFA)
L’emploi d’un anticorps marqué avec un dérivé fluorescent dérivé de la fluorescéine, de
la rhodamine ou d’une luminarine, est utilisé pour nombre d’immunoglobulines humaines
et animales. En revanche, la transposition de ce principe au domaine des tests immunochimiques de composés organiques simples est encore quasi inexistante. On peut craindre
qu’il se produise une discrimination entre les espèces marquées et non marquées, lorsqu’on
récupère par un procédé physicochimique une petite molécule organique ainsi étiquetée. Il
existe donc peu d’exemples de dosages comportant une récupération suivie d’un examen de
la fluorescence.
Sous le terme d’immunofluorescence sont regroupées plusieurs techniques de diagnostic
qui ne correspondent pas à des dosages mais à la mise en évidence, à l’examen au microscope sous éclairage en lumière ultraviolette, de certaines parties de la préparation obtenue
par réaction avec un dérivé fluorescent tel l’isocyanate de fluorescéine très utilisé en biochimie.
O
CO 2 H
N
O
C S
© Dunod – La photocopie non autorisée est un délit
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17.9 AVANTAGES ET DÉFAUTS DES TESTS ELISA EN CHIMIE
Les diverses techniques ELISA donnent des résultats précis et fiables. Les résultats sont
obtenus plus rapidement que par chromatographie. Ils sont surtout destinés à éliminer tous
les échantillons négatifs qu’il n’est donc pas utile de soumettre aux étapes d’extraction puis
d’analyse chromatographique. Ils ont cependant quelques inconvénients :
1. La reconnaissance éventuelle de plusieurs molécules avec des sensibilités différentes
est une source de dispersion des résultats. Il existe donc un risque de réaction croisée
(un faux positif).
2. La gamme de mesure est étroite. Dès que la concentration augmente, on se trouve dans
une zone de moindre précision (effet de l’échelle logarithmique pour les concentrations). On doit donc trouver la bonne dilution de l’échantillon.
3. Les microplaques doivent comporter des puits contenant tous la même quantité d’anticorps, avec la même réactivité, ce qui est techniquement difficile. L’immunisation
d’un animal de laboratoire est un événement singulier, ce qui explique que les résultats puissent différer d’un kit à un autre.
4. La conservation des kits doit se faire au froid. Elle est limitée dans le temps, surtout
pour les analyses sur le terrain.
5. On doit tenir compte dans le prix de revient de ces tests, des essais en double, des standards. Ces analyses ne deviennent rentables que pour un nombre important de dosages.
17.10 FLUORO-IMMUNOLOGIE (IFA)
L’emploi d’un anticorps marqué avec un dérivé fluorescent dérivé de la fluorescéine, de
la rhodamine ou d’une luminarine, est utilisé pour nombre d’immunoglobulines humaines
et animales. En revanche, la transposition de ce principe au domaine des tests immunochimiques de composés organiques simples est encore quasi inexistante. On peut craindre
qu’il se produise une discrimination entre les espèces marquées et non marquées, lorsqu’on
récupère par un procédé physicochimique une petite molécule organique ainsi étiquetée. Il
existe donc peu d’exemples de dosages comportant une récupération suivie d’un examen de
la fluorescence.
Sous le terme d’immunofluorescence sont regroupées plusieurs techniques de diagnostic
qui ne correspondent pas à des dosages mais à la mise en évidence, à l’examen au microscope sous éclairage en lumière ultraviolette, de certaines parties de la préparation obtenue
par réaction avec un dérivé fluorescent tel l’isocyanate de fluorescéine très utilisé en biochimie.
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© Dunod – La photocopie non autorisée est un délit