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Partie 3 • Autres méthodes
M = 12360 Da
700
800
900 m z
/
m z
/
687,5
884
773
773,25 773,50 773,75 774
Figure 16.24 Ions moléculaires multichargés.
Spectre obtenu à partir du cytochrome C (cœur de cheval), protéine de 12 360 Da, par
la méthode électrospray. Entre 2 pics consécutifs, la charge de l’ion varie d’une unité. À
droite, amas isotopique du cytochrome en haute résolution. On peut retrouver à partir
de ces spectres par deux méthodes indépendantes des valeurs très proches de la masse
moléculaire ainsi que le nombre de charges portées par les ions (avec l’autorisation de
F.W. McLafferty, et Coll. Anal. Chem. 1995, 67, 3802-3805).
16.11 SPECTROMÈTRES DE MASSE EN TANDEM (MS/MS)
Pour obtenir des informations plus précises sur la structure des ions fragments issus de la
décomposition des composés moléculaires introduits, on fait appel à des spectromètres de
masse comportant au minimum deux analyseurs en série. Il ne s’agit pas de la mise bout à
bout d’appareils distincts, mais de l’association dans un appareil hybride soit d’un secteur
magnétique suivi d’un quadripôle, soit de deux quadripôles, soit d’un TOF avec un second
quadripôle (ou l’inverse). Entre les deux analyseurs est placée une chambre de collision
(fig. 16.25). Il existe plusieurs façons d’utiliser de tels appareils.
➤ Une première technique consiste à sélectionner les ions correspondant à un rapport m/z
choisi au moyen du premier analyseur qui joue ainsi le rôle d’un filtre. Ces ions traversent ensuite la chambre de collision (CID, Collision Ionic Dissociation) dans laquelle
on fait arriver un gaz (hélium, argon ou diazote). Il s’ensuit de nouvelles décompositions.
Les ions fils de fragmentation poursuivent leur course vers le second analyseur, utilisé
en mode normal, ce qui conduit à un spectre donnant des informations de structure de
l’ion m/z sélectionné en amont, à l’exclusion des autres ions formés dans la source de
l’appareil (recherche de filiations).
➤ Dans une autre technique on règle le second analyseur pour qu’il ne laisse passer que les
ions d’un même rapport m/z et on fait un balayage des masses avec le premier analyseur.
On repère ainsi tous les ions donnant le même fragment (recherche des parents).
➤ Enfin on peut faire un double balayage synchrone des deux analyseurs avec un décalage
correspondant à une masse donnée (ex. un fragment neutre tel CO ou C 2 H 2 ). On repérera
alors les ions de la source qui se décomposent en éliminant le fragment en question
(recherche des neutres).
Partie 3 • Autres méthodes
M = 12360 Da
700
800
900 m z
/
m z
/
687,5
884
773
773,25 773,50 773,75 774
Figure 16.24 Ions moléculaires multichargés.
Spectre obtenu à partir du cytochrome C (cœur de cheval), protéine de 12 360 Da, par
la méthode électrospray. Entre 2 pics consécutifs, la charge de l’ion varie d’une unité. À
droite, amas isotopique du cytochrome en haute résolution. On peut retrouver à partir
de ces spectres par deux méthodes indépendantes des valeurs très proches de la masse
moléculaire ainsi que le nombre de charges portées par les ions (avec l’autorisation de
F.W. McLafferty, et Coll. Anal. Chem. 1995, 67, 3802-3805).
16.11 SPECTROMÈTRES DE MASSE EN TANDEM (MS/MS)
Pour obtenir des informations plus précises sur la structure des ions fragments issus de la
décomposition des composés moléculaires introduits, on fait appel à des spectromètres de
masse comportant au minimum deux analyseurs en série. Il ne s’agit pas de la mise bout à
bout d’appareils distincts, mais de l’association dans un appareil hybride soit d’un secteur
magnétique suivi d’un quadripôle, soit de deux quadripôles, soit d’un TOF avec un second
quadripôle (ou l’inverse). Entre les deux analyseurs est placée une chambre de collision
(fig. 16.25). Il existe plusieurs façons d’utiliser de tels appareils.
➤ Une première technique consiste à sélectionner les ions correspondant à un rapport m/z
choisi au moyen du premier analyseur qui joue ainsi le rôle d’un filtre. Ces ions traversent ensuite la chambre de collision (CID, Collision Ionic Dissociation) dans laquelle
on fait arriver un gaz (hélium, argon ou diazote). Il s’ensuit de nouvelles décompositions.
Les ions fils de fragmentation poursuivent leur course vers le second analyseur, utilisé
en mode normal, ce qui conduit à un spectre donnant des informations de structure de
l’ion m/z sélectionné en amont, à l’exclusion des autres ions formés dans la source de
l’appareil (recherche de filiations).
➤ Dans une autre technique on règle le second analyseur pour qu’il ne laisse passer que les
ions d’un même rapport m/z et on fait un balayage des masses avec le premier analyseur.
On repère ainsi tous les ions donnant le même fragment (recherche des parents).
➤ Enfin on peut faire un double balayage synchrone des deux analyseurs avec un décalage
correspondant à une masse donnée (ex. un fragment neutre tel CO ou C 2 H 2 ). On repérera
alors les ions de la source qui se décomposent en éliminant le fragment en question
(recherche des neutres).