7 • Chromatographie d’exclusion stérique
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a
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diamètre des pores : G2000 : 125Å ; G3000 : 250Å
G 2000
G 3000
*** PLgel MIXED-B
élution (mL)
élution (mL)
G 2000
G 3000
20
30
40
b
M (daltons)
M (daltons)
PS de filtration sur gel
PS de filtration sur gel
PS de perméation de gel
PS de perméation de gel
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10 Å
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g e l p a n a c h é
* PLgel 5µm, pores 10 Å
4
** PLgel 5µm, pores 10 Å
3
*
**
***
M (Da)
M (Da)
10 Å
3
Figure 7.3 Comparaison de colonnes de filtration sur gel et de perméation de gel
et caractéristiques de phases stationnaires.
a) Graphe indiquant le domaine de masse de 2 phases en filtration sur gel et de 3
phases en perméation de gel ; b) courbes d’étalonnage
logM = f(V)
de ces différentes
phases, obtenues avec des protéines connues pour les colonne de filtration sur gel et des
standards de polystyrène pour les autres. Une pente faible de la partie linéaire témoigne
d’une meilleure résolution entre masses voisines. C’est le cas lorsque les pores ont une
dimension régulière. Les courbes logM = f(K) tracées moins fréquemment ont même
aspect (reproduit avec l’autorisation des sociétés Tosohaas et Polymer Lab.). Pour les
protéines on ajoute quelquefois des dénaturants afin de détruire d’éventuels agrégats
en phase aqueuse.
7.3 TRAITEMENT DU CHROMATOGRAMME
Chaque phase stationnaire est décrite pour un solvant donné par une courbe d’étalonnage
établie à partir de macromolécules ou de polymères monodispersés de masses M connues
et de même structure que l’échantillon : polystyrènes, polyoxyéthylènes, pullulanes ou polyéthylèneglycols... (fig. 7.3 et tableau 7.1). Les courbes représentant logM en fonction du
© Dunod – La photocopie non autorisée est un délit
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élution (mL)
élution (mL)
G 2000
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M (daltons)
M (daltons)
PS de filtration sur gel
PS de filtration sur gel
PS de perméation de gel
PS de perméation de gel
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* PLgel 5µm, pores 10 Å
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** PLgel 5µm, pores 10 Å
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M (Da)
M (Da)
10 Å
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Figure 7.3 Comparaison de colonnes de filtration sur gel et de perméation de gel
et caractéristiques de phases stationnaires.
a) Graphe indiquant le domaine de masse de 2 phases en filtration sur gel et de 3
phases en perméation de gel ; b) courbes d’étalonnage
logM = f(V)
de ces différentes
phases, obtenues avec des protéines connues pour les colonne de filtration sur gel et des
standards de polystyrène pour les autres. Une pente faible de la partie linéaire témoigne
d’une meilleure résolution entre masses voisines. C’est le cas lorsque les pores ont une
dimension régulière. Les courbes logM = f(K) tracées moins fréquemment ont même
aspect (reproduit avec l’autorisation des sociétés Tosohaas et Polymer Lab.). Pour les
protéines on ajoute quelquefois des dénaturants afin de détruire d’éventuels agrégats
en phase aqueuse.
7.3 TRAITEMENT DU CHROMATOGRAMME
Chaque phase stationnaire est décrite pour un solvant donné par une courbe d’étalonnage
établie à partir de macromolécules ou de polymères monodispersés de masses M connues
et de même structure que l’échantillon : polystyrènes, polyoxyéthylènes, pullulanes ou polyéthylèneglycols... (fig. 7.3 et tableau 7.1). Les courbes représentant logM en fonction du
© Dunod – La photocopie non autorisée est un délit