Chapitre II
Matériel et méthodes
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L’échantillon à doser est incubé en présence du réactif de Biuret pendant 10 minutes à température
ambiante à l’abris de la lumière. La densité optique est alors déterminée à une absorbance à 540
nm (dans le visible) à l’aide de cuves spectrophotométriques en plastique.
 Préparation du réactif de Biuret :
- 1.5 g de sulfate de cuivre II penta hydraté (CuSO45H2O) ;
- 6 g de Tartrate de sodium potassium tetrahydraté (NaKC4H4O64H2O)
- Dissoudre dans 500 ml d’eau distillée dans un BECHER ;
- Ajouter 300ml de NaOH ;
- Compléter le volume jusqu’à 1L avec l’eau distillée ;
- Rajouter 1g d’iodure de Potassium (KI) ;
- Storage dans un contenant en plastique à l’abris de la lumière.
Le réactif de Biuret (produit final) est de couleur bleu.
 Préparation de la gamme étalon :
Les réactions des essais sont réalisées dans des tubes à essai au laboratoire dans une température
ambiante en maintenant le réactif de BIURET à l’abri de la lumière ;
Préparation de la solution mère :
- 10mg de la BSA (bovine sérum albumine) dans10ml d’eau bi-distillée ;
 [C prot] =1mg/ml).
La gamme étalon a été effectuée comme suit, (Tableau 1)
Tableau II-1 : La gamme d'étalonnage de la BSA
tubes
1
2
3
4
5
6
7
8
10 11 12 13 14 15 16 17 18
Réactif de
Biuret(ml)
2
2
2
2
2
2
2
2
2
2
2
2
2
2
2
2
Eau
bidistillée(ml)
1
0.9 0.8 0.7
0.6
0.5 0.4 0.3
0.1 0.0
9
0.0
8
0.0
7
0.0
6
0.0
5
0.0
4
0.0
3
0.0
2
BSA(ml)
0
0.1 0.2 0.3
0.4
0.5 0.6 0.7
0.9 0.9
1
0.9
2
0.9
3
0.9
4
0.9
5
0.9
6
0.9
7
0.9
8
Concentration
(mg/ml)
0
1
2
3
4
5
6
7
11 12 13 14 15 16 17 18 19