Chapitre 3
Matériels et Méthodes
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8. Étude bactériologique :
8.1. Prélèvements :
Un examen bactériologique doit être effectué sur un échantillon correctement prélevé,
dans des flacons stérile, selon un mode opératoire précis évitant toute contamination
accidentelle, correctement transporté au laboratoire et analysé après une courte durée
de conservation dans des conditions satisfaisantes (Maul ; 1997).
 Les échantillons sont prélevés dans des flacons de verre de 500 ml, stérilisés
à l’autoclave à 120°C pendant 20 minutes.
 Les flacons sont ouverts, remplis et refermés sous l’eau pour éviter toute contamination
avec l’air.
 Les échantillons sont transportés dans une glacière isotherme (4°C) à l’abri
de la lumière.
 Pour éviter les modifications de la teneur initiale, l’analyse ne doit pas excéder
24 heures.
8.2. Le dénombrement bactérien :
La méthode de filtration sur membrane consiste à recueillir, sur une membrane stérile
un volume donné de produit à analyser (eau usée, eau de consommation, et l’eau de mer),
la membrane est ensuite déposée sur un milieu nutritif convenable ; après incubation,
les colonies sont dénombrer et identifier (Champiat et al ; 1994).
8.2.1. Matériels :
 Dispositif de filtration (voire figure 13)
 Bec-besen pour la stérilisation de la zone de travail.
 Boite Pétri avec les milieux des cultures spécifiques pour chaque germe.
 Membranes d’ester de cellulose, filtrantes stériles quadrillées de porosité de 0.45μm
et de 49mm X 9mm de diamètre susceptible de retenir les bactéries.
 Incubateur dont la température est ajustée selon le germe étudié.
 Pompe à vide.
 Pince stérilisée.
 Pipette.
8.2.2. Mode opératoire :
La réalisation de cette technique a été faite selon le protocole suivant :
En présence du bec bunsen et sur une paillasse javellisée (AICHIOU ; 2006)
 Flamber la face supérieure (plaque poreuse) de l’appareil, fermer le robinet du support
et mettre en marche la pompe à vide.
 Prélever une membrane stérile en la saisissant par son bord extérieur, avec une pince
flambée et refroidie ; la déposer sur la plaque poreuse.
 L’entonnoir-réservoir flambé et refroidi est placé au-dessous de la membrane.