_____________________________ CHAPITRE II : MATERIEL ET METHODES
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II-1-5- Tests d’identification
II-1-5-1- Coloration de Gram
La coloration de Gram est une coloration différentielle du cytoplasme basée sur les
caractéristiques de la paroi bactérienne. Elle permet de différencier les bactéries Gram positif
des bactéries à Gram négatif.
Mode opératoire :
 Réaliser un frottis et le fixer à la flamme.
 Verser le violet de Gentiane sur la lame ; laisser en contact 1min.
 Fixer le colorant par le lugol environ 1min.
 Jeter le lugol et faire couler de l’alcool sur la préparation ; laisser agir 30s et rincer
immédiatement à l’eau.
 Recouvrir la préparation defushine, laisser agir environ 1min puis laver abondamment
à l’eau.
 Sécher au-dessus de la flamme d’un bec bunsen.
Lecture :
A l’issue d’une observation au microscope optique, on peut distinguer :
Des bactéries à Gram positif colorée en violet foncé.
Des bactéries à Gram négatif colorée en rose.
II-1-5-2-Test d’oxydase
Le test oxydase consiste à mettre en évidence la présence du cytochrome oxydase.
Mode opératoire :
 Imbiber le disque d’oxydase par l’eau distillée.
 Prendre à l’aide d’une pipette Pasteur une colonie isolée et la déposer sur le disque.
Lecture :
Apparition d’une coloration violette au point de contact, soit immédiatement soit après
quelques secondes. Ce résultat révèle la présence du cytochrome oxydase.