Chapitre II : Matériels et méthodes
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 Couler la gélose contenant le milieu sélectif dans les boites de pétri et laisser solidifier.
D. Deroulement de la filtration :
 Stériliser la surface supérieure de la rampe de filtration.
 La posee la eeeeaae suu la plaaue pooeuse a l’aide d’uue piiie stttile.
 Agitee soiggeuseeeet le flaaoo d’eau a aaallss.
 Veesee stttileeeet la uaatitt d’eau ddsiiie à aaallss.
 Ouvvii le ooiiet pouu laissee l’eau s’’’oulee.
 Dés que la membrane paaait ssshe eelevee l’eetooooii et ppplevee la eeeeaae avee uue
pince stérile.
 Déposer la membrane sur le milieu sélectif (gélose au Chapman).
 Incubation à 36 ± 2 °C Pendant 44 ± 4 h les boites de pétri, le couvercle ver le bas.
 Appps la pppiode d’iiiuuation procédé aux tests de confirmation.
E. Dénombrement et confirmation :
 Appes la pppiode d’iiiuuatioo, oo dddooooe les olooies aaaatttistiiues Staphhlooooues à
coagulase positive ou plus particulièrement staphylococcus aureus), qui apparaissent sous
forme de petites colonies lisses légèrement bombéesà contours réguliers et pigmentées soit
en jaune ou en blanc.
 Prendre 3 a 5 colonies au hasard, pour confirmation :
 Test a la catalase :
 Plaaee uue goutte d’uue solutioo de peeooode d’hhddoggge HHOOO à
volumes sur une
lame de microscope.
 Prélever une demi-oloooe avee uue pipette pasteuu l’’’ulsioooee douueeeet daas la
goutte d’ HHOO.
 s’il a appaaitioo de ulles d’oooggge atalase positivee ou aaseeee Catalase gativee.
 Les observations peuvent se faiie aaaossopiiueeeet ou à l’aide d’uu iiiossope a faiile
grossissement.
 Test à la coagulase :
 Apres incubation du bouillon BHIB, ajouter stérilement 0.1 ml de cette culture à 0.3 ml de
plasma de lapin contenu dans un tube stérile à essai ou à hémolyse, et incuber de nouveau à
36 ± 2 °C pendant 2 à 6 heures.
 Examiner la coagulase du plasma de lapin sinon ré-incuber à 20 ± 4 heures et examiner de
nouveau.