Chapitre II : Matériels et méthodes
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II.4.3.5. Recherche des staphylocoques selon la norme (NF EN ISO 6888-1) :
La eeheeehe des staphhlooooues est asse suu la filttatioo de la ppise d’essai de l’’’haatilloo à
travers une membrane filtaate d’uue pooositt de ...
.
Dépôt de cette dernière sur un milieu sélectif, gélose Chapman au mannitol.
Incubation à 36 ± 2 °C pendant 44 ± 4 h.
Dénombrement des colonies caractéristiques formées sur la membrane filtrante par comptage. Ils
apparaissent sous forme de petites colonies lisses, légèrement bombées à contours réguliers et
pigmentées soit en jaune (fermentation du mannitol) ou en blanc qui seront soumis ensuite aux tests
de confirmation.
La confirmation est basée sur la recherche de l’eezzze atalase.
Et suu la eeheeehe de l’eezzze oagulase(NF EN ISO 6888-1).
A. Appareillage utilisé pour la filtration :
 Rampe de filtration en acier inoxydable stérilisée à la flamme avant chaqueanalyse.
 Pompe a vide
 Membranes de filtration stériles de ,,,
de pooositt.
 Pinces stérile.
 Etuves à 36 ± 2°C.
 Boites de Petri Ø 55 mm.
 Bec Bunsen.
 Pipettes pasteur.
 Tube à hémolyse ou tube à essai stériles.
B.Milieux de cultures et réactifs :
 Gélose Chapman au mannitol.
 Peeooode d’hhddoggge HHOO.
 Bouillon B.H.I.B.
 Plasma de lapin.
C. Préparation des milieux de culture :
 Utiliser un bain marie à une température de 100° C.
 Faire fondre le flacon contenant la gélose stérile.
 Maintenir à une température de 80° C et laisser refroidir à une T°C de 50° C.