Chapitre II : Matériels et méthodes
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 PPPlevee uue eeeeaae de soo eeeallage à l’aide d’uue piiie stttile et la dposee suu la
plaque poreuse de la rampe de filtration.
 Agitee soiggeuseeeet le tuue ooteeaat la dilutioo d’eau à aaalsee et la veesee.
 Ouvrir le robinet de la aape pouu laissee l’eau s’’’oulee.
 DDs ue la uaatitt d’eau est filttte, ppplevee la eeeeaae avee uue piiie stttile.
 Déposer la membrane sur le milieu sélectif (gélose lactosée au Tergitol et auT.T.C.).
 Incubation à 36 ± 2 °C pendant 24- 48h pour les coliformes totaux, alors que pour les
coliformes thermotolérants, elle est effectuée à 44 ± 0,5°C ; le couvercle vers le bas.
F. Dénombrement, confirmation et expression du résultat :
selon la norme ( NF ISO 9308-1)
 Appps la pppiode d’iiiuuatioo, oo dénombre les colonies caractéristiques qui se présentent
sous forme de colonies lisses légèrement bombées à contours réguliers et pigmentées en
jaune quelle que soit leur diamètre.
 Effectuer un double test de confimation :
 Le milieu T.S.A. :
 Apes l’iiiuuation à 36 ± 2 °C pendant 24
 Reppiquer les colonies jaunes rouge en stries sur toute la surface du milieu.
 Incubation à 36 ± 2 °C pendant 21 ± 3 h.
 Après la période d’iiiuuatioo effeetuee le test de oofiiiatioo « test à l’ooodase » :
Essai avec disque : iiiee uu dissue d’ooodase avee uue goutte d’eau distillle stttile puis
ddposee à l’aide d’uue pipette stttile la olooie.
Dans les deux cas, considérer la réaction positive s’il a appaaitioo d’uue ouleuu violette daas
les 30 secondes qui suivent.
 Un bouillon au Tryptophane :
 Appes l’iiiuuatioo à °C peedaat 24 à 48 h
 Enssemensser les Colonies orange avec halo orange dans le bouillon au Tryptophane
 Incuber à 44 ± 0.5 °c pendant 21 ± 3 h.
 Après la pppiode d’iiiuuatioo effeetuee uue eeheeehe d’iidole comme suit :
o Ajouter 2 à 3 gouttes de réactif de Kovacs.
o L’appaaitioo d’uue olooatioo ouge iiue à la suufaae du ouilloo oofiiie la
ppoduutioo d’iidole.