Matériels et méthodes
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Figure (17): photo de l’inoculation d’une galerie Api 20 E
II-6- Diffusion en milieu gélosé : Antibiogramme
L’étude de la résistance de nos souches vis-à-vis de 21 antibiotiques a été réalisée par la
méthode de diffusion en milieu solide (Courvalin, 1985 ; CA-SFM, 2010).
Principe :
Cette technique est basée sur l’observation de la croissance bactérienne en présence d’un
gradient de concentration d’antibiotique, obtenu par diffusion à partir des disques
d’antibiotiques dans un milieu gélosé (Muller-Hinton). Ce gradient est inversement
proportionnel à la distance par rapport aux disques. La croissance s’arrête lorsque les
bactéries sont en contact avec leur concentration minimale d’inhibition dessinant ainsi des
halos d’inhibition autour du disque d’antibiotique.
Technique :
A partir d’une culture jeune (18-24h), préparer dans 5ml d’eau physiologique une
suspension bactérienne de 0,5 McFarland (10 8 cellules/ml).
Ajuster l’inoculum à 10 7 cellules/ml
Plonger un écouvillon stérile dans la suspension bactérienne de 10 7 cellules/ml.
Ensemencer la boite en frottant l’écouvillon sur la totalité de la surface gélosée et en
tournant la boite trois fois de 60° afin d’assurer une bonne distribution de
l’inoculum,
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Figure (17): photo de l’inoculation d’une galerie Api 20 E
II-6- Diffusion en milieu gélosé : Antibiogramme
L’étude de la résistance de nos souches vis-à-vis de 21 antibiotiques a été réalisée par la
méthode de diffusion en milieu solide (Courvalin, 1985 ; CA-SFM, 2010).
Principe :
Cette technique est basée sur l’observation de la croissance bactérienne en présence d’un
gradient de concentration d’antibiotique, obtenu par diffusion à partir des disques
d’antibiotiques dans un milieu gélosé (Muller-Hinton). Ce gradient est inversement
proportionnel à la distance par rapport aux disques. La croissance s’arrête lorsque les
bactéries sont en contact avec leur concentration minimale d’inhibition dessinant ainsi des
halos d’inhibition autour du disque d’antibiotique.
Technique :
A partir d’une culture jeune (18-24h), préparer dans 5ml d’eau physiologique une
suspension bactérienne de 0,5 McFarland (10 8 cellules/ml).
Ajuster l’inoculum à 10 7 cellules/ml
Plonger un écouvillon stérile dans la suspension bactérienne de 10 7 cellules/ml.
Ensemencer la boite en frottant l’écouvillon sur la totalité de la surface gélosée et en
tournant la boite trois fois de 60° afin d’assurer une bonne distribution de
l’inoculum,