Matériels et méthodes
25
La prévalence de la résistance chez les coliformes a été déterminée par le nombre de
coliformes résistants rapportés au nombre de coliformes totaux retrouvés sur le milieu
au Tergitol.
II-5- Identification des bactéries résistantes
Toutes les bactéries résistantes sur amoxicilline, ticarcilline et ciprofloxacine, ont été réisolées sur Mueller Hinton supplémenté de l'antibiotique approprié, afin de confirmer
leur résistance. Les bactéries isolées ont été conservées et identifiées par des galeries
API 20E (Biomérieux).
Principe :
La galerie API 20E est un système d’identification des entérobactéries et autres bacilles à
Gram négatif. Elle comporte 20 tests biochimiques standardisés et miniaturisés. Les milieux
déshydratés sont reconstitués avec une suspension bactérienne. Les réactions produites
pendant la période d’incubation se traduisent par des virages colorés spontanés ou révélés par
l’addition de réactifs (Biomérieux).
Technique :
Réunir fond et couvercle d’une boite d’incubation et répartir environ 5ml d’eau stérile
dans les alvéoles afin de créer une atmosphère humide,
Retirer la galerie stérile de son emballage et la déposer dans la boite d’incubation,
Préparer l’inoculum bactérien : mettre 1 à 3 colonies jeunes dans de l’eau distillée
stérile,
Inoculer la galerie comme suit(figure 17)
Remplir les tubes et cupules des tests (CIT, VP et GEL).
Remplir uniquement les tubes (et non les cupules) des autres tests.
Créer une anaérobiose dans les tests : ADH, LDC, ODC, H 2 S, URE, en remplissant leur
cupule d’huile de vaseline.
Incuber à 37°C pendant 24 à 48 heures.
Le test d’oxydase est réalisé par le dépôt d’un inoculum bactérien sur le disque
d’oxydase. La présence du cytochrome oxydase se traduit par l’apparition d’une
coloration violette.
Lecture :
Ces galeries doivent être lues selon les recommandations du fournisseur. Après codification
des réactions en un profil numérique, l’identification est obtenue on se référant à un catalogue
analytique (Biomérieux).
25
La prévalence de la résistance chez les coliformes a été déterminée par le nombre de
coliformes résistants rapportés au nombre de coliformes totaux retrouvés sur le milieu
au Tergitol.
II-5- Identification des bactéries résistantes
Toutes les bactéries résistantes sur amoxicilline, ticarcilline et ciprofloxacine, ont été réisolées sur Mueller Hinton supplémenté de l'antibiotique approprié, afin de confirmer
leur résistance. Les bactéries isolées ont été conservées et identifiées par des galeries
API 20E (Biomérieux).
Principe :
La galerie API 20E est un système d’identification des entérobactéries et autres bacilles à
Gram négatif. Elle comporte 20 tests biochimiques standardisés et miniaturisés. Les milieux
déshydratés sont reconstitués avec une suspension bactérienne. Les réactions produites
pendant la période d’incubation se traduisent par des virages colorés spontanés ou révélés par
l’addition de réactifs (Biomérieux).
Technique :
Réunir fond et couvercle d’une boite d’incubation et répartir environ 5ml d’eau stérile
dans les alvéoles afin de créer une atmosphère humide,
Retirer la galerie stérile de son emballage et la déposer dans la boite d’incubation,
Préparer l’inoculum bactérien : mettre 1 à 3 colonies jeunes dans de l’eau distillée
stérile,
Inoculer la galerie comme suit(figure 17)
Remplir les tubes et cupules des tests (CIT, VP et GEL).
Remplir uniquement les tubes (et non les cupules) des autres tests.
Créer une anaérobiose dans les tests : ADH, LDC, ODC, H 2 S, URE, en remplissant leur
cupule d’huile de vaseline.
Incuber à 37°C pendant 24 à 48 heures.
Le test d’oxydase est réalisé par le dépôt d’un inoculum bactérien sur le disque
d’oxydase. La présence du cytochrome oxydase se traduit par l’apparition d’une
coloration violette.
Lecture :
Ces galeries doivent être lues selon les recommandations du fournisseur. Après codification
des réactions en un profil numérique, l’identification est obtenue on se référant à un catalogue
analytique (Biomérieux).