Chapitre III
Matériels et méthodes
2007/2008
23
Cette compagne a également été l’occasion de tester l’effet de la congélation sur les mesures
de concentrations des nitrates et des phosphates. Des échantillons prélevés en duplicat ont été
congelé à – 20°C dans des fioles à scintillation en polythène. L’analyse de ces échantillons a
été effectuée au laboratoire 60 jours après la fin de la compagne selon les mêmes protocoles
de dosage. Malgré la faible teneur en nitrates et phosphates des eaux méditerranéennes, il
existe une parfaite correspondance entre les résultats obtenus en mer après analyse immédiate
et ceux obtenus au laboratoire après 2 mois de congélation.
2.1.3. Dosage de la chlorophylle a et des phaeopigments
Les concentrations en chlorophylle a et en phaeopigments ont été déterminées selon la
méthode fluorimétrie de yenstch Menzel (1963) adapté par Holm- Hansen et Reimann (1978)
pour l’extraction des pigments à l’aide du méthanol. Le protocole utilisé au cours de la
compagne Médiprod VI a été précédemment décrit par Herbland et al. (1985) et Raimbault et
al. (1988).
Les échantillons d’eau de mer (250 ml) prélevés sur les bouteilles de la rosette différents
niveaux de la couche euphotique, sont filtrés sur un filtre en fibre de verre (filtre Whatman
GF/F de diamètre 25 mm). La dépression utilisée pour la filtration est toujours inférieure à
100 mm Hg. Immédiatement après la filtration, le filtre est placé dans un tube de verre
contenant 5 ml de méthanol pur. La teneur en eau résiduelle sur le filtre après filtration étant
de 0,19 ± 0,02 ml (test effectué sur 20 filtres), l’extraction s’effectué dans 5,2 ml de méthanol
à 97%. Le tube bouché est ensuite placé à l’obscurité et la température de 5°C dans le
réfrigérateur du bord, pour une période d’extraction de 30 minutes.
Après ce délai, la fluorescence des échantillons est mesurée sur un fluorimètre Turner
Desings 10.005 R, équipé pour la détermination de la chlorophylle a ( lampe F4T4 BL, filtre
primaire Corning 5-60, filtre secondaire Corning 2-(F a ) avec 50 µl d’acide chlorhydrique 0,5
N, afin d’estimer la part des phaeopigments. Les concentrations sont évaluées d’après les
formules de Lorenzen (1966) :
Chlorophylle a = (F 0 –F a / K 0 – Ka) x (v/V)
Phaeopigments µg/l = (K 0 F a – K a F 0 )/ k a (k 0 -k a ) x (v/V)
F 0 : fluorescence avant acidification.
F a : fluorescence après acidification.
v : volume d’extraction ; V = volume filtré.
K 0 : coefficient d’étalonnage du fluorimètre pour la chlorophylle a.
K a : coefficient d’étalonnage du fluorimètre pour la chlorophylle a acidifiée
(= phaeopigments).
Matériels et méthodes
2007/2008
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Cette compagne a également été l’occasion de tester l’effet de la congélation sur les mesures
de concentrations des nitrates et des phosphates. Des échantillons prélevés en duplicat ont été
congelé à – 20°C dans des fioles à scintillation en polythène. L’analyse de ces échantillons a
été effectuée au laboratoire 60 jours après la fin de la compagne selon les mêmes protocoles
de dosage. Malgré la faible teneur en nitrates et phosphates des eaux méditerranéennes, il
existe une parfaite correspondance entre les résultats obtenus en mer après analyse immédiate
et ceux obtenus au laboratoire après 2 mois de congélation.
2.1.3. Dosage de la chlorophylle a et des phaeopigments
Les concentrations en chlorophylle a et en phaeopigments ont été déterminées selon la
méthode fluorimétrie de yenstch Menzel (1963) adapté par Holm- Hansen et Reimann (1978)
pour l’extraction des pigments à l’aide du méthanol. Le protocole utilisé au cours de la
compagne Médiprod VI a été précédemment décrit par Herbland et al. (1985) et Raimbault et
al. (1988).
Les échantillons d’eau de mer (250 ml) prélevés sur les bouteilles de la rosette différents
niveaux de la couche euphotique, sont filtrés sur un filtre en fibre de verre (filtre Whatman
GF/F de diamètre 25 mm). La dépression utilisée pour la filtration est toujours inférieure à
100 mm Hg. Immédiatement après la filtration, le filtre est placé dans un tube de verre
contenant 5 ml de méthanol pur. La teneur en eau résiduelle sur le filtre après filtration étant
de 0,19 ± 0,02 ml (test effectué sur 20 filtres), l’extraction s’effectué dans 5,2 ml de méthanol
à 97%. Le tube bouché est ensuite placé à l’obscurité et la température de 5°C dans le
réfrigérateur du bord, pour une période d’extraction de 30 minutes.
Après ce délai, la fluorescence des échantillons est mesurée sur un fluorimètre Turner
Desings 10.005 R, équipé pour la détermination de la chlorophylle a ( lampe F4T4 BL, filtre
primaire Corning 5-60, filtre secondaire Corning 2-(F a ) avec 50 µl d’acide chlorhydrique 0,5
N, afin d’estimer la part des phaeopigments. Les concentrations sont évaluées d’après les
formules de Lorenzen (1966) :
Chlorophylle a = (F 0 –F a / K 0 – Ka) x (v/V)
Phaeopigments µg/l = (K 0 F a – K a F 0 )/ k a (k 0 -k a ) x (v/V)
F 0 : fluorescence avant acidification.
F a : fluorescence après acidification.
v : volume d’extraction ; V = volume filtré.
K 0 : coefficient d’étalonnage du fluorimètre pour la chlorophylle a.
K a : coefficient d’étalonnage du fluorimètre pour la chlorophylle a acidifiée
(= phaeopigments).