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Annexe 05 : Extraction et dosage des protéines à partir de la chair des
poissons par la méthode de KJELDAHL, TP de Nutrition et
Alimentation des Poissons 4
ème année aquaculture
L’extraction et le dosage des protéines ont été effectués selon la méthode de référence
méthode de KJELDAHL
Principe : La détermination des protéines par la méthode Kjeldahl s’effectue en trois
étapes :
Etape 1 : Digestion ou minéralisation de l’échantillon :
Pendant l’étape de la digestion, l’azote protéique est transformé en azote ammoniacal par
oxydation de la matière organique dans l’acide sulfurique concentré à haute température,
en présence d’un catalyseur et d’un sel :
L’acide sulfurique concentré a pour but d’oxyder la matière organique et
transformer l’azote protéique en ammoniac NH₃.
L’addition du sel de sulfate de potassium (K₂SO₄) a pour but d’élever le
point d’ébullition de la solution pour accélérer la réaction de minéralisation
de la matière organique.
Le catalyseur utilisé est le sélénium Se.
La réaction chimique est la suivante :
H₂SO₄+N (aliment)
SO₄(NH₄)₂
Etape 2 : Distillation de l’ammoniac :
Avant de distiller l’ammoniac à la vapeur d’eau, on doit libérer l’ammoniac sous la forme
du sel (NH₄)₂SO₄ par l’addition d’une solution concentrée de soude (NaOH) en excès.
L’ammoniac est ensuite distillé par la vapeur d’eau et piégé dans solution d’acide borique.
L’ammoniac réagit avec l’acide borique pour former des sels de borate d’ammonium et
Les transformations chimiques sont :
SO₄(NH₄)₂ +2NaOH
SO₄Na₂+2NH₄OH
NH₄OH + H₃BO₃
BO₃H₂NH₄ + H₂O (Sel de borate d’ammonium).
Etape 2 : Titrage de l’ammoniac :
L’ammoniac sous la forme de borate d’ammonium est titré directement à l’aide d’une
solution standardisée d’acide chlorhydrique HCl, et d’un indicateur (le Tashiro). On fait un
blanc en mettant tous les réactifs sauf l’échantillon, pour soustraire l’ammoniac contenu
dans les réactifs de l’ammoniac contenu dans l’échantillon.
Annexe 05 : Extraction et dosage des protéines à partir de la chair des
poissons par la méthode de KJELDAHL, TP de Nutrition et
Alimentation des Poissons 4
ème année aquaculture
L’extraction et le dosage des protéines ont été effectués selon la méthode de référence
méthode de KJELDAHL
Principe : La détermination des protéines par la méthode Kjeldahl s’effectue en trois
étapes :
Etape 1 : Digestion ou minéralisation de l’échantillon :
Pendant l’étape de la digestion, l’azote protéique est transformé en azote ammoniacal par
oxydation de la matière organique dans l’acide sulfurique concentré à haute température,
en présence d’un catalyseur et d’un sel :
L’acide sulfurique concentré a pour but d’oxyder la matière organique et
transformer l’azote protéique en ammoniac NH₃.
L’addition du sel de sulfate de potassium (K₂SO₄) a pour but d’élever le
point d’ébullition de la solution pour accélérer la réaction de minéralisation
de la matière organique.
Le catalyseur utilisé est le sélénium Se.
La réaction chimique est la suivante :
H₂SO₄+N (aliment)
SO₄(NH₄)₂
Etape 2 : Distillation de l’ammoniac :
Avant de distiller l’ammoniac à la vapeur d’eau, on doit libérer l’ammoniac sous la forme
du sel (NH₄)₂SO₄ par l’addition d’une solution concentrée de soude (NaOH) en excès.
L’ammoniac est ensuite distillé par la vapeur d’eau et piégé dans solution d’acide borique.
L’ammoniac réagit avec l’acide borique pour former des sels de borate d’ammonium et
Les transformations chimiques sont :
SO₄(NH₄)₂ +2NaOH
SO₄Na₂+2NH₄OH
NH₄OH + H₃BO₃
BO₃H₂NH₄ + H₂O (Sel de borate d’ammonium).
Etape 2 : Titrage de l’ammoniac :
L’ammoniac sous la forme de borate d’ammonium est titré directement à l’aide d’une
solution standardisée d’acide chlorhydrique HCl, et d’un indicateur (le Tashiro). On fait un
blanc en mettant tous les réactifs sauf l’échantillon, pour soustraire l’ammoniac contenu
dans les réactifs de l’ammoniac contenu dans l’échantillon.