Matériel et méthodes
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Mode opératoire : (Figure 25)
• Raccorder les différents composants d’appareil de filtration ;
• Flamber la face supérieure (plaque poreuse) de la rampe ;
• Bien placer l’entonnoir stérile (flambé ou stérilisé) sur la base de filtres ;
• Verser un volume d’eau distillée a fin de refroidir le dispositif ;
• Placer une membrane stérile d’une porosité de 0,45µm, côté quadrillé vers le haut, sur
le disque poreux en ne saisissant que le bord extérieur de la membrane à l’aide d’une
pince à mors plat, stérile ;
• Transvaser dans l’entonnoir un volume de l’échantillon bien mélangé ;
• Ouvrir le robinet et appliquer le vide. Dès que la membrane parait sèche, refermer le
robinet ;
• Retirer l’entonnoir et transférer la membrane à l’aide de la même pince stérile dans un
tube puis ensemencer comme indiquer dans la fiche AFNOR.
Figure 25. (1) Membrane de filtration. (2). Dilutions (3). Incubation à 37°C.
• Incuber les boites pendant (2-10jrs) à 37°C.
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