Matériel et méthodes
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II.6.2. Méthode de diffusion sur disques
Principe :
Les méthodes de diffusion sur disques, ont toujours joui d'une grande popularité dans les
laboratoires de microbiologie clinique, en raison de la relative simplicité de la technique et la
capacité de tester facilement plusieurs agents antimicrobiens sur chaque isolat bactérien. La
méthode consiste à placer des disques de papier imprégnés d'antimicrobiens sur la surface de
la gélose qui a déjà été ensemencée avec les bactéries à tester. L'agent antimicrobien diffuse
ensuite, dans la gélose où il peut inhiber la croissance des bactéries dans une zone entourant le
disque (JAMES- BIEMER,1973).
La souche testée est une souche ATCC 33152 Legionella pneumophila.
Mode opératoire : (Figure 18)
• Préparer une suspension bactérienne d’une densité de 0.5 McFarland dans l’eau
physiologique à partir d’une culture jeune (48-72h) ;
• Etaler à l’aide d’un écouvillon la suspension sur milieu BCYE ;
• Placer les disques sur la gélose après les avoir imbibés avec 80 µl de solution de
chitosane ;
• Incuber pendant (2-10jrs) à 37 °C.
Lecture :
Pour tous les tests d’antagonisme, les diamètres des zones d’inhibition apparaissant autour des
disques seront mesurés, le résultat est positif si le diamètre de la zone d’inhibition est
supérieur à 2 mm (TABAK et al, 2007).