CHAPITRE IV
Matériel & Méthodes
87
Les tests ont été effectués conformément aux procédures standards; la toxicité (inhibition de
la bioluminescence) a été exprimée en pourcentage de l'inhibition de la bioluminescence
Le Microtox Modèle 500 est un photomètre de laboratoire qui mesure la toxicité aiguë. Cet
analyseur est un système de mesure de biocapteur à étalonnage automatique, à température
contrôlée, qui utilise la bioluminescence d'Allivibrio fischeri pour déterminer la toxicité de
l'eau contaminée ou des élutriats de sols et de sédiments contaminés. Le biodétecteur
considère qu’une pollution toxique est présente quand on atteint une inhibition de
luminescence supérieure à 20 %.
Procédure :
• Préparation des échantillons de sédiment : Des échantillons de sédiments ont été mis
en suspension dans de l'eau de mer artificielle stérile (1/4; p/v). Après sonication (30
min) et une agitation vigoureuse (200 × g pendant 24 h), la phase aqueuse a été
séparée du sédiment par filtrations successives et a été utilisée comme matrice pour les
tests de toxicité. Ensuite ; des dilutions sériées ont été préparées (10 fois) avec une
solution de NaCl à 2%. Les échantillons ont été maintenus à 4 ± 1 ° C jusqu'à leur
utilisation dans le test.
• Préparation de la suspension bactérienne : dissoudre la bactérie lyophilisée avec 1 ml
de solution reconstituante, puis préparer des dilution (10 fois) avec une solution de
NaCl à 2%
• Préparer un blanc de contrôle (solution de NaCl à 2%)
• Transférer la suspension bactérienne (100 µl) dans 5 flacons de mesure.
• Mesurer la bioluminescence initiale de la suspension bactérienne.
• Transférer le blanc ainsi que toutes les dilutions préparées d’échantillons (900 µl) dans
les flacons de mesure contenant la suspension bactérienne diluée
• Incuber pendant 30 min à une température de 15 ° C.
• Mesurer la bioluminescence du blanc et des échantillons.
• Détermination des pourcentages d’inhibition par le logiciel MicrotoxOmniTM
• Pourcentage d’inhibition=100-((luminescence test/luminescence blanc) *100)
IV.3 Mesure de l’abondance bactérienne.
L'abondance bactérienne a été mesurée pour les échantillons d'eau de mer par comptage direct
sous épifluorescence. Le principe consiste à colorer les bactéries au moyen d’un marqueur
fluorescent, les recueillir sur une membrane montée entre lame et lamelle ce qui permettra
Matériel & Méthodes
87
Les tests ont été effectués conformément aux procédures standards; la toxicité (inhibition de
la bioluminescence) a été exprimée en pourcentage de l'inhibition de la bioluminescence
Le Microtox Modèle 500 est un photomètre de laboratoire qui mesure la toxicité aiguë. Cet
analyseur est un système de mesure de biocapteur à étalonnage automatique, à température
contrôlée, qui utilise la bioluminescence d'Allivibrio fischeri pour déterminer la toxicité de
l'eau contaminée ou des élutriats de sols et de sédiments contaminés. Le biodétecteur
considère qu’une pollution toxique est présente quand on atteint une inhibition de
luminescence supérieure à 20 %.
Procédure :
• Préparation des échantillons de sédiment : Des échantillons de sédiments ont été mis
en suspension dans de l'eau de mer artificielle stérile (1/4; p/v). Après sonication (30
min) et une agitation vigoureuse (200 × g pendant 24 h), la phase aqueuse a été
séparée du sédiment par filtrations successives et a été utilisée comme matrice pour les
tests de toxicité. Ensuite ; des dilutions sériées ont été préparées (10 fois) avec une
solution de NaCl à 2%. Les échantillons ont été maintenus à 4 ± 1 ° C jusqu'à leur
utilisation dans le test.
• Préparation de la suspension bactérienne : dissoudre la bactérie lyophilisée avec 1 ml
de solution reconstituante, puis préparer des dilution (10 fois) avec une solution de
NaCl à 2%
• Préparer un blanc de contrôle (solution de NaCl à 2%)
• Transférer la suspension bactérienne (100 µl) dans 5 flacons de mesure.
• Mesurer la bioluminescence initiale de la suspension bactérienne.
• Transférer le blanc ainsi que toutes les dilutions préparées d’échantillons (900 µl) dans
les flacons de mesure contenant la suspension bactérienne diluée
• Incuber pendant 30 min à une température de 15 ° C.
• Mesurer la bioluminescence du blanc et des échantillons.
• Détermination des pourcentages d’inhibition par le logiciel MicrotoxOmniTM
• Pourcentage d’inhibition=100-((luminescence test/luminescence blanc) *100)
IV.3 Mesure de l’abondance bactérienne.
L'abondance bactérienne a été mesurée pour les échantillons d'eau de mer par comptage direct
sous épifluorescence. Le principe consiste à colorer les bactéries au moyen d’un marqueur
fluorescent, les recueillir sur une membrane montée entre lame et lamelle ce qui permettra