Chapitre II :
Matériel et méthodes.
24
II.5.5 Recherche des Vibrio
La recherche des vibrions se fait en trois étapes (Rodier, 1996) :
Pré-enrichissement : L’essai est réalisé à partir de 10ml d’échantillon diluées dans
150 ml d’eau peptonnée alcaline, puis incubés 24 h à 37 °C.
Enrichissement : Transférer 1 ml du bouillon de pré enrichissement dans un tube
de 10 ml d’eau peptonnée alcaline. Incuber 18 -24 h à 37 °C.
Isolement : à partir du bouillon d’enrichissement, un isolement sur milieu sélectif :
La gélose thiosulfate, au citrate, à la bille et au saccharose (TCBS) à 37°C pendant 24 h.
L’identification des colonies isolées par la coloration de Gram, le test d’oxydase, et un test
de catalase, puis un ensemencement d’une galerie API 20 E.
II.5.6 Recherche des Salmonelles
Selon les recommandations de JOFFIN et JOFFIN (2010), nous avons procédé comme
suit :
Pré-enrichissement : On met 2.5 ml d’échantillon dans 10 fois son volume d’eau
peptonnée tamponnée. Incubation à 37 °C pendant 24h.
Enrichissement : Transférer 1 ml du bouillon de pré enrichissement dans un tube
de 10 ml Le bouillon sélénite-cystine (SFB), Incubation à 37°C pendant 24 h.
Ensemencement : Les cultures sont repiquées sur la gélose sélective (Hecktoen) et
l’ensemencement du milieu est effectué par des stries, puis incuber à 37°C / 24 h.
L’identification des colonies suspectes (lactose négatif), commence par une coloration de
Gram, un test d’oxydase puis un ensemencement d’une galerie API 20E à 37°C / 24 h.
II.5.7 Recherche des entérobactéries et les bactéries lactose positif
La recherche des entérobactéries et des bactéries lactose positif a été effectuée en milieu
liquide (BVBL) et en milieu solide (MacConkey).
II.5.7.1 Recherche sur BVBL
A partir de 1ml d’échantillon, la recherche du caractère coliforme se base sur la propriété
commune des coliformes à fermenter le lactose tout en produisant du gaz dans une période
de 24-48h, dans des tubes munis de cloches de Durham. La présence des germes
recherchés se traduit par un trouble dans toute la masse liquide et un dégagement de gaz
dans les cloches.
Matériel et méthodes.
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II.5.5 Recherche des Vibrio
La recherche des vibrions se fait en trois étapes (Rodier, 1996) :
Pré-enrichissement : L’essai est réalisé à partir de 10ml d’échantillon diluées dans
150 ml d’eau peptonnée alcaline, puis incubés 24 h à 37 °C.
Enrichissement : Transférer 1 ml du bouillon de pré enrichissement dans un tube
de 10 ml d’eau peptonnée alcaline. Incuber 18 -24 h à 37 °C.
Isolement : à partir du bouillon d’enrichissement, un isolement sur milieu sélectif :
La gélose thiosulfate, au citrate, à la bille et au saccharose (TCBS) à 37°C pendant 24 h.
L’identification des colonies isolées par la coloration de Gram, le test d’oxydase, et un test
de catalase, puis un ensemencement d’une galerie API 20 E.
II.5.6 Recherche des Salmonelles
Selon les recommandations de JOFFIN et JOFFIN (2010), nous avons procédé comme
suit :
Pré-enrichissement : On met 2.5 ml d’échantillon dans 10 fois son volume d’eau
peptonnée tamponnée. Incubation à 37 °C pendant 24h.
Enrichissement : Transférer 1 ml du bouillon de pré enrichissement dans un tube
de 10 ml Le bouillon sélénite-cystine (SFB), Incubation à 37°C pendant 24 h.
Ensemencement : Les cultures sont repiquées sur la gélose sélective (Hecktoen) et
l’ensemencement du milieu est effectué par des stries, puis incuber à 37°C / 24 h.
L’identification des colonies suspectes (lactose négatif), commence par une coloration de
Gram, un test d’oxydase puis un ensemencement d’une galerie API 20E à 37°C / 24 h.
II.5.7 Recherche des entérobactéries et les bactéries lactose positif
La recherche des entérobactéries et des bactéries lactose positif a été effectuée en milieu
liquide (BVBL) et en milieu solide (MacConkey).
II.5.7.1 Recherche sur BVBL
A partir de 1ml d’échantillon, la recherche du caractère coliforme se base sur la propriété
commune des coliformes à fermenter le lactose tout en produisant du gaz dans une période
de 24-48h, dans des tubes munis de cloches de Durham. La présence des germes
recherchés se traduit par un trouble dans toute la masse liquide et un dégagement de gaz
dans les cloches.